pTol2-ubiquitin-EGFP-nr5a1b(zebrafish) 载体 (V018100)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pTol2-ubiquitin-EGFP-nr5a1b(zebrafish)
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
9227 bp
载体类型:
Protein expression, Transposition
复制子:
ori
宿主:
Mammalian cells
5'引物:
pEGFP-C-5'
感受态:
DH5a
培养温度:
37℃

pTol2-ubiquitin-EGFP-nr5a1b(zebrafish) 载体图谱

pTol2-ubiquitin-EGFP-nr5a1b(zebrafish)9227 bp400800120016002000240028003200360040004400480052005600600064006800720076008000840088009200EGFPSV40 poly(A) signalSK primerT3 promoterM13 revlac operatorlac promoterCAP binding siteori

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pTol2-ubiquitin-EGFP-nr5a1b(zebrafish) 载体序列

LOCUS       .                       9227 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     CDS             4550..5266
                     /label="EGFP"
                     /note="the original enhanced GFP (Yang et al., 1996)"
     polyA_signal    complement(6887..7008)
                     /label="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     primer_bind     complement(7680..7696)
                     /label="SK primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     promoter        complement(7733..7751)
                     /label="T3 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(7772..7788)
                     /label="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     protein_bind    complement(7796..7812)
                     /label="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(7820..7850)
                     /label="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    complement(7865..7886)
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(8174..8762)
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"