我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pAAV-hSyn-mCherry
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5247 bp
- 载体类型:
- AAV
- 载体来源:
- Karl Deisseroth
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- hSyn
- 感受态:
- Top10
- 培养温度:
- 37℃
pAAV-hSyn-mCherry 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pAAV-hSyn-mCherry 载体序列
LOCUS Exported 5247 bp DNA circular SYN 01-SEP-2025
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAAV-hSyn-mCherry
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5247)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5247
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 175..622
/label=hSyn promoter
/note="human synapsin I promoter; confers neuron-specific
expression (Kugler et al., 2003)"
CDS 642..1349
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/label=mCherry
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="VSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGT
QTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFE
DGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKG
EIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAE
GRHSTGGMDELYK"
misc_feature 1374..1962
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(1845..1856)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/label=Factor Xa site
/translation="IEGR"
polyA_signal 1994..2470
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 2510..2650
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 2725..3180
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3462..3566
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 3567..4427
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 4598..5186
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"