质粒编号
质粒名称
规格
价格
V018120
pN1-cAMPinG1
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Expression vector of genetically encoded cAMP indicator, cAMPinG1. cAMPinG1 under the control of a CAG promoter with expression enhanced by WPRE (woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element).
- 载体名称:
- pN1-cAMPinG1
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7368 bp
- 载体类型:
- BLE84607
- 载体来源:
- Tatsushi Yokoyama
- 感受态:
- Top10
- 培养温度:
- 37℃
pN1-cAMPinG1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pN1-cAMPinG1 载体序列
LOCUS Exported 7368 bp DNA circular SYN 22-MAR-2025
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7368)
AUTHORS RIKEN DNA Bank
TITLE Direct Submission
COMMENT RDB19691_pN1-cAMPinG1
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7368
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 95..1694
/label=CAG promoter
enhancer 95..398
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 400..677
/label=chicken beta-actin promoter
intron 678..1694
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
CDS 1803..3458
/codon_start=1
/label=cAMPinG1
/label=CyA033
/translation="MGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDLATMVDEDAASYVR
KVIPKDYKTMAALAKAIEKNVLFSHLDDNERSDIFDAMFPVSFIAGETVIQQGDEGDNF
YVIDQGEMDVYVSWPVYIKADKQKNGIKANFKIWHNIEDGGVQLAYHYQQNTPIGDGPV
LLPDNHYLLVQSSLSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKGGTGGSMVSKGEEL
FTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTY
GVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYIQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIEL
KGIDFKEDGNILGHKLEYNGWATSVGEGGSFGELALIYGTPRAATVKAKTNVKLWGIDR
DSYRRILMGSTLRKRKMYEEFLSKVSILESLDKWERLTVADALEPVQFEDGQKIVVQGE
PGDEFFIILEGTAAVLQRRSENEEFVEVGRLGPSDYFGEIALLMNRPRAATVVARGPLK
CVKLDRPRFERVLGPCSDILKRNIQQYNSFVSLSV"
CDS 1812..1829
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
CDS 1833..1865
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS 1869..1892
/codon_start=1
/product="Xpress(TM) epitope tag, including an enterokinase
recognition and cleavage site"
/label=Xpress(TM) tag
/translation="DLYDDDDK"
misc_feature 3493..4081
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
polyA_signal 4110..4231
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4331..4786)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 4813..4917
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 4919..5276
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
enhancer 4919..5110
/label=SV40 enhancer
/note="enhancer for the SV40 early promoter (Herr, 1993)"
rep_origin 5127..5262
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 5311..6105
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 6337..6384
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
misc_feature 6713..7301
/label=pUC ori