pYES2-EGFP 载体 (V012744)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pYES2-EGFP
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
6548 bp
载体类型:
Yeast Plasmids
复制子:
ori
筛选标记:
URA3
拷贝数:
High copy number
启动子:
GAL1
克隆方法:
Enzyme Cut
5'引物:
EGFP-N-F: TGTACGGTGGGAGGTCTAT
3'引物:
CYC1 Terminator: GTGACATAACTAATTACATGATG
表达方法:
galactose induced

pYES2-EGFP 载体图谱

pYES2-EGFP6548 bp300600900120015001800210024002700300033003600390042004500480051005400570060006300CYC1 terminatorGFP (S65T)T7 promoterGAL1 promoterM13 ori2u oriURA3 promoterURA3ISSori

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pYES2-EGFP 载体序列

LOCUS       40924_48028        6548 bp DNA     circular SYN 11-SEP-2021
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6548)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 6548)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6548
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     terminator      complement(4..251)
                     /label=CYC1 terminator
                     /note="transcription terminator for CYC1"
     CDS             complement(314..1027)
                     /codon_start=1
                     /label=GFP (S65T)
                     /note="S65T variant of Aequorea victoria green fluorescent 
                     protein (Heim et al., 1995)"
                     /translation="MGKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
                     FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG
                     NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV
                     NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
                     FVTAAGITHGMDELYK"
     promoter        complement(1059..1077)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     promoter        complement(1109..1551)
                     /label=GAL1 promoter
                     /note="inducible promoter, regulated by Gal4"
     rep_origin      1570..2083
                     /label=M13 ori
                     /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     rep_origin      2094..2974
                     /label=2u ori
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     promoter        3573..3793
                     /label=URA3 promoter
     CDS             3794..4594
                     /codon_start=1
                     /label=URA3
                     /note="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required for
                     uracil biosynthesis"
                     /translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
                     ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
                     YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
                     YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
                     VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
     misc_feature    4877..5255
                     /label=ISS
                     /note="immunostimulatory sequence from the AmpR gene;
                     contains unmethylated CpG dinucleotides in the context of 
                     5'-AACGTT-3' (Sato et al., 1996)"
     rep_origin      5724..6312
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"