质粒编号
质粒名称
规格
价格
V012744
pYES2-EGFP
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pYES2-EGFP vector is an episomal high-copy plasmid, fusued with an EGFP reporter, designed for galactose-inducible protein expression in Saccharomyces cerevisiae.
- 载体名称:
- pYES2-EGFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6552 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- URA3
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- GAL1
- 克隆方法:
- Enzyme Cut
- 5'引物:
- EGFP-N-F: TGTACGGTGGGAGGTCTAT
- 3'引物:
- CYC1 Terminator: GTGACATAACTAATTACATGATG
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
- 表达方法:
- galactose induced
pYES2-EGFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pYES2-EGFP 载体序列
LOCUS Exported 6552 bp DNA circular SYN 19-SEP-2025
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6552)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 6552)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6552)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6552
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
source 8..14
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
terminator complement(5..259)
/label=CYC1 terminator
/note="transcription terminator for CYC1"
CDS complement(322..1035)
/codon_start=1
/label=GFP (S65T)
/note="S65T variant of Aequorea victoria green fluorescent
protein (Heim et al., 1995)"
/translation="MGKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK
FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG
NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV
NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE
FVTAAGITHGMDELYK"
promoter complement(1067..1085)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter complement(1117..1558)
/label=GAL1 promoter
/note="inducible promoter, regulated by Gal4"
rep_origin 1580..2093
/label=M13 ori
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin 2104..2981
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
promoter 3582..3797
/label=URA3 promoter
CDS 3798..4601
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/label=URA3
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
CDS 4697..5557
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5728..6316
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"