我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pYES2-EGFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6548 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- URA3
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- GAL1
- 克隆方法:
- Enzyme Cut
- 5'引物:
- EGFP-N-F: TGTACGGTGGGAGGTCTAT
- 3'引物:
- CYC1 Terminator: GTGACATAACTAATTACATGATG
- 表达方法:
- galactose induced
pYES2-EGFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pYES2-EGFP 载体序列
LOCUS 40924_48028 6548 bp DNA circular SYN 11-SEP-2021 DEFINITION synthetic circular DNA. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 6548) TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 6548) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..6548 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" terminator complement(4..251) /label=CYC1 terminator /note="transcription terminator for CYC1" CDS complement(314..1027) /codon_start=1 /label=GFP (S65T) /note="S65T variant of Aequorea victoria green fluorescent protein (Heim et al., 1995)" /translation="MGKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKV NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE FVTAAGITHGMDELYK" promoter complement(1059..1077) /label=T7 promoter /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase" promoter complement(1109..1551) /label=GAL1 promoter /note="inducible promoter, regulated by Gal4" rep_origin 1570..2083 /label=M13 ori /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow indicates direction of (+) strand synthesis" rep_origin 2094..2974 /label=2u ori /note="yeast 2u plasmid origin of replication" promoter 3573..3793 /label=URA3 promoter CDS 3794..4594 /codon_start=1 /label=URA3 /note="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required for uracil biosynthesis" /translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN" misc_feature 4877..5255 /label=ISS /note="immunostimulatory sequence from the AmpR gene; contains unmethylated CpG dinucleotides in the context of 5'-AACGTT-3' (Sato et al., 1996)" rep_origin 5724..6312 /direction=RIGHT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication"