pWPXLd 载体 (V010152)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pWPXLd
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
10455 bp
载体类型:
Mammalian Expression, Lentiviral
复制子:
ori
拷贝数:
High Copy
启动子:
EF-1α
克隆方法:
Restriction Enzyme
5'引物:
See map

pWPXLd 载体图谱

pWPXLd10455 bp500100015002000250030003500400045005000550060006500700075008000850090009500100003' LTRHIV-1 PsiRREgp41 peptideProtein TatEF-1-alpha promotercPPT/CTSEGFPWPRE3' LTR (Delta-U3)SP6 promoterpBRrevBampRS-markerpGEX 3'pBRforEcoAmpR promoterAmpRoriL4440SV40 promotersmall t intronSV40 NLSSV40 poly(A) signal

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pWPXLd 载体序列

LOCUS       V010152                10455 bp    DNA     circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V010152
VERSION     V010152
KEYWORDS    pWPXLd
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 10455)
  TITLE     Trono Lab Constitutive Lentiviral Plasmids
REFERENCE   2  (bases 1 to 10455)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 10455)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..10455
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     LTR             2..635
                     /label="3' LTR"
                     /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    682..807
                     /label="HIV-1 Psi"
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus
                     type 1"
     misc_feature    1300..1533
                     /label="RRE"
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
                     cytoplasm."
     CDS             1718..1762
                     /label="gp41 peptide"
                     /note="antigenic peptide corresponding to amino acids 655
                     to 669 of the HIV envelope protein gp41 (Lutje Hulsik et
                     al., 2013)"
     CDS             1911..1952
                     /note="Protein Tat from Human immunodeficiency virus type 1
                     group M subtype B (isolate WMJ22). Accession#: P12509"
                     /label="Protein Tat"
     promoter        2120..3297
                     /label="EF-1-alpha promoter"
                     /note="strong constitutive promoter for human elongation
                     factor EF-1-alpha"
     misc_feature    3345..3462
                     /label="cPPT/CTS"
                     /note="central polypurine tract and central termination
                     sequence of HIV-1"
     CDS             3544..4260
                     /label="EGFP"
                     /note="enhanced GFP"
     misc_feature    4340..4928
                     /label="WPRE"
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
                     regulatory element"
     LTR             5017..5250
                     /label="3' LTR (Delta-U3)"
                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
                     HIV-1"
     promoter        complement(5275..5293)
                     /label="SP6 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(5583..5602)
                     /label="pBRrevBam"
                     /note="pBR322 vectors, tet region, downstream of BamHI,
                     reverse primer"
     primer_bind     complement(5816..5835)
                     /label="pRS-marker"
                     /note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
                     marker"
     primer_bind     5935..5957
                     /label="pGEX 3'"
                     /note="pGEX vectors, reverse primer"
     primer_bind     complement(5995..6013)
                     /label="pBRforEco"
                     /note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
                     primer"
     promoter        6081..6185
                     /label="AmpR promoter"
     CDS             6186..7043
                     /label="AmpR"
                     /note="beta-lactamase"
     rep_origin      7217..7805
                     /direction=RIGHT
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     primer_bind     7959..7976
                     /label="L4440"
                     /note="L4440 vector, forward primer"
     promoter        8051..8380
                     /label="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     intron          9514..9579
                     /label="small t intron"
                     /note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
     CDS             9709..9729
                     /label="SV40 NLS"
                     /note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
                     40) large T antigen"
     polyA_signal    10154..10288
                     /label="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"