我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pAV012
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4577 bp
- 载体类型:
- Cloning vector
- 复制子:
- R6K γ ori
- 载体来源:
- White KP, Victorsen A.
- 启动子:
- mPGK
pAV012 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pAV012 载体序列
LOCUS 40924_5089 4577 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION Cloning vector pAV012, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4577)
AUTHORS White KP, Victorsen A.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (15-JUL-2013) Human Genetics, The University of Chicago,
5801 South Ellis Avenue, Chicago, IL 60637, USA
REFERENCE 2 (bases 1 to 4577)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 4577)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(15-JUL-2013) Human Genetics, The University of Chicago, 5801 South
Ellis Avenue, Chicago, IL 60637, USA"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4577
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
rep_origin 26..414
/label=R6K gamma ori
/note="gamma replication origin from E. coli plasmid R6K;
requires the R6K initiator protein pi for replication"
promoter 509..613
/label=AmpR promoter
CDS 614..1471
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
misc_feature 1583..1867
/note="sGFP exon 1; 1st exon of superfolder green
fluorescent protein"
primer_bind 1583..1604
/label=forward recombineering primer binding site
/note="forward recombineering primer binding site"
misc_feature 1941..1974
/label=loxP
/note="loxP"
protein_bind 1941..1974
/label=loxP
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
promoter 1989..2488
/label=PGK promoter
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
promoter 2505..2552
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter"
CDS 2571..3371
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
protein_bind complement(3507..3540)
/label=loxP
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (ATGTATGC) (Shaw et al., 2021)."
promoter 3604..3622
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
CDS 4109..4126
/label=tetracysteine tag
/note="tetracysteine peptide that binds biarsenical
labeling reagents"
CDS 4148..4171
/label=Strep-Tag II
/note="peptide that binds Strep-Tactin(R), an engineered
form
of streptavidin"
CDS 4172..4192
/label=TEV site
/note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
CDS 4235..4258
/label=FLAG
/note="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
primer_bind complement(4265..4288)
/label=reverse recombineering primer binding site
/note="reverse recombineering primer binding site"
oriT complement(4334..4443)
/direction=LEFT
/label=oriT
/note="incP origin of transfer"