我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5958 bp
- 载体类型:
- AAV
- 复制子:
- ori
- 启动子:
- cTnT
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- ACGACTCACTATAGGCTAGC
- 3'引物:
- AGGGACTTCGGGCACAATCG
AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
AAV-U6gRNA1-U6gRNA2-TnT-Cre 载体序列
LOCUS 40924_160 5958 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION AAV vector for U6 driven expression of two gRNAs, and cardiomyocyte
specific expression of Cre recombinase..
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5958)
AUTHORS Guo Y, VanDusen NJ, Zhang L, Gu W, Sethi I, Guatimosim S, Ma Q,
Jardin BD, Ai Y, Zhang D, Chen B, Guo A, Yuan GC, Song LS, Pu WT
TITLE Analysis of Cardiac Myocyte Maturation Using CASAAV, A Platform for
Rapid Dissection of Cardiac Myocyte Gene Function In Vivo.
JOURNAL Circ Res. 2017 Mar 29. pii: CIRCRESAHA.116.310283. doi:
10.1161/CIRCRESAHA.116.310283.
PUBMED 28356340
REFERENCE 2 (bases 1 to 5958)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 5958)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Circ Res.
2017 Mar 29. pii: CIRCRESAHA.116.310283. doi:
10.1161/CIRCRESAHA.116.310283."
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5958
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 1..241
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 278..353
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
promoter 366..606
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 633..708
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
promoter 721..1133
/label=cTnT
/note="Chicken cardiac troponin T promoter"
intron 1260..1392
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1437..1455
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1467..1487
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
CDS 1485..2513
/codon_start=1
/label=Cre
/note="site-specific recombinase"
/translation="VSNLLTVHQNLPALPVDATSDEVRKNLMDMFRDRQAFSEHTWKML
LSVCRSWAAWCKLNNRKWFPAEPEDVRDYLLYLQARGLAVKTIQQHLGQLNMLHRRSGL
PRPSDSNAVSLVMRRIRKENVDAGERAKQALAFERTDFDQVRSLMENSDRCQDIRNLAF
LGIAYNTLLRIAEIARIRVKDISRTDGGRMLIHIGRTKTLVSTAGVEKALSLGVTKLVE
RWISVSGVADDPNNYLFCRVRKNGVAAPSATSQLSTRALEGIFEATHRLIYGAKDDSGQ
RYLAWSGHSARVGAARDMARAGVSIPEIMQAGGWTNVNIVMNYIRNLDSETGAMVRLLE
DGD"
polyA_signal 2554..3030
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 3070..3210
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 3285..3740
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind complement(3757..3776)
/label=pRS-marker
/note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
marker"
primer_bind 3876..3898
/label=pGEX 3'
/note="pGEX vectors, reverse primer"
primer_bind complement(3936..3954)
/label=pBRforEco
/note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
primer"
promoter 4022..4126
/label=AmpR promoter
CDS 4127..4984
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5158..5746
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
repeat_region 5808..5937
/label=AAV2 ITR (alternate)
/note="Functional equivalent of wild-type AAV2 ITR"