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pGGF001 载体 (V005997)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pGGF001
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
3889 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
ori
载体来源:
Lampropoulos A, Sutikovic Z, Wenzl C, Maegele I, Lohmann JU, Forner J.
启动子:
MAS

pGGF001 载体图谱

pGGF0013889 bp60012001800240030003600AmpR promoterAmpRoriCAP binding sitelac promoterlac operatorSP6 promoterBsaI recognition siteMAS promoterBlpRMAS terminatorBsaI recognition siteT7 promoter

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pGGF001 载体序列

LOCUS       40924_21788        3889 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Cloning vector pGGF001, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3889)
  AUTHORS   Lampropoulos A, Sutikovic Z, Wenzl C, Maegele I, Lohmann JU, Forner 
            J.
  TITLE     GreenGate - A Novel, Versatile, and Efficient Cloning System for 
            Plant Transgenesis
  JOURNAL   PLoS ONE 8 (12), E83043 (2013)
  PUBMED    24376629
REFERENCE   2  (bases 1 to 3889)
  AUTHORS   Forner J.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (28-SEP-2013) Centre for Organismal Studies, 
            Ruprecht-Karls-Universitaet Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 230, 
            Heidelberg D-69221, Germany
REFERENCE   3  (bases 1 to 3889)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 3889)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "PLoS ONE"; 
            date: "2013"; volume: "8"; issue: "12"; pages: "E83043"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (28-SEP-2013) Centre for Organismal Studies, 
            Ruprecht-Karls-Universitaet Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 230, 
            Heidelberg D-69221, Germany"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
COMMENT     ##Assembly-Data-START##
            Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing 
            ##Assembly-Data-END##
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3889
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        96..200
                     /label=AmpR promoter
     CDS             201..1058
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1232..1820
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     protein_bind    2108..2129
                     /label=CAP binding site
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        2144..2174
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    2182..2198
                     /label=lac operator
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        2212..2230
                     /label=SP6 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
     misc_feature    2241..2246
                     /label=BsaI recognition site
                     /note="BsaI recognition site"
     promoter        2254..2634
                     /label=MAS promoter
                     /note="mannopine synthase promoter (Velten et al., 1984)"
     CDS             2645..3193
                     /codon_start=1
                     /label=BlpR
                     /note="phosphinothricin acetyltransferase"
                     /translation="MSPERRPADIRRATEADMPAVCTIVNHYIETSTVNFRTEPQEPQE
                     WTDDLVRLRERYPWLVAEVDGEVAGIAYAGPWKARNAYDWTAESTVYVSPRHQRTGLGS
                     TLYTHLLKSLEAQGFKSVVAVIGLPNDPSVRMHEALGYAPRGMLRAAGFKHGNWHDVGF
                     WQLDFSLPVPPRPVLPVTEI"
     terminator      3202..3454
                     /label=MAS terminator
                     /note="mannopine synthase terminator"
     misc_feature    complement(3460..3465)
                     /label=BsaI recognition site
                     /note="BsaI recognition site"
     promoter        complement(3476..3494)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"