我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pTKIP-hygro
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4491 bp
- 载体类型:
- Donor vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Kuhlman TE, Cox EC.
- 启动子:
- mPGK
pTKIP-hygro 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pTKIP-hygro 载体序列
LOCUS 40924_43548 4491 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION Donor vector pTKIP-hygro, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4491)
AUTHORS Kuhlman TE, Cox EC.
TITLE Site-specific chromosomal integration of large synthetic constructs
JOURNAL Nucleic Acids Res. 38 (6), E92 (2010)
PUBMED 20047970
REFERENCE 2 (bases 1 to 4491)
AUTHORS Kuhlman TE, Cox EC.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (17-DEC-2009) Molecular Biology, Princeton University,
Washington Rd., Princeton, NJ 08544, USA
REFERENCE 3 (bases 1 to 4491)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 4491)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nucleic
Acids Res."; date: "2010"; volume: "38"; issue: "6"; pages: "E92"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(17-DEC-2009) Molecular Biology, Princeton University, Washington
Rd., Princeton, NJ 08544, USA"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4491
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS 238..426
/codon_start=1
/label=rop
/note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/translation="VTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 531..671
/label=bom
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(857..1445)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1619..2476)
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2477..2581)
/label=AmpR promoter
misc_feature 2607..2624
/label=I-SceI recognition site
/note="I-SceI recognition site"
misc_feature 2625..2649
/label=Landing Pad Region 1
/note="Landing Pad Region 1"
primer_bind 2668..2684
/label=KS primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 2706..2739
/label=FRT (minimal)
/note="supports FLP-mediated excision but not integration
(Turan and Bode, 2011)"
promoter 2803..3302
/label=PGK promoter
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
promoter 3314..3361
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter"
CDS 3380..4378
/codon_start=1
/label=HygR
/note="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF
GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRP"
misc_feature 4415..4448
/label=FRT
/note="FRT"
protein_bind 4415..4448
/label=FRT (minimal)
/bound_moiety="FLP recombinase from the Saccharomyces
cerevisiae 2u plasmid"
/note="supports FLP-mediated excision but not integration
(Turan and Bode, 2011)"
misc_feature 4449..4473
/label=Landing Pad Region 2
/note="Landing Pad Region 2"
misc_feature 4474..4491
/label=I-SceI recognition site
/note="I-SceI recognition site"