首页技术支持质粒载体

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSilent-1
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
7056 bp
载体类型:
Ascomycete silencing vector
复制子:
ori
载体来源:
Nakayashiki H, Hanada S, Nguyen BQ, Kadotani N, Tosa Y, Mayama S.
启动子:
trpC
感受态:
stbl3
培养温度:
37℃

pSilent-1 载体图谱

pSilent-17056 bp30060090012001500180021002400270030003300360039004200450048005100540057006000630066006900AmpR promoterAmpRoriCAP binding sitelac promoterlac operatorM13 revT3 promotertrpC promoterHygRtrpC terminatorSK primerKS primerCUT introntrpC terminatorT7 promoterM13 fwdf1 ori

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSilent-1 载体序列

LOCUS       40924_40392        7056 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Ascomycete silencing vector pSilent-1, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7056)
  AUTHORS   Nakayashiki H, Hanada S, Nguyen BQ, Kadotani N, Tosa Y, Mayama S.
  TITLE     RNA silencing as a tool for exploring gene function in ascomycete 
            fungi
  JOURNAL   
REFERENCE   2  (bases 1 to 7056)
  AUTHORS   De Schamphelaire W, Olbrechts A, Meert J, Verhelst K, Roggeman 
            Fonseca M, Vanhoucke M, Beyaert R.
  TITLE     BCCM/LMBP Plasmid collection
  JOURNAL   Unpublished
REFERENCE   3  (bases 1 to 7056)
  AUTHORS   De Schamphelaire W.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (15-MAR-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent, 
            Technologiepark 927, 9052, BELGIUM
REFERENCE   4  (bases 1 to 7056)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   5  (bases 1 to 7056)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Fungal 
            genetics and biology : FG "
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: 
            "Unpublished"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (15-MAR-2017) BCCM/LMBP, Universiteit Gent, Technologiepark 927, 
            9052, BELGIUM"
COMMENT     SGRef: number: 4; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7056
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        24..128
                     /label=AmpR promoter
     CDS             129..986
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     rep_origin      1160..1748
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     protein_bind    2036..2057
                     /label=CAP binding site
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        2072..2102
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    2110..2126
                     /label=lac operator
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     primer_bind     2134..2150
                     /label=M13 rev
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     promoter        2171..2189
                     /label=T3 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
     promoter        2234..2588
                     /label=trpC promoter
                     /note="promoter for Aspergillus nidulans trpC"
     CDS             2593..3615
                     /label=HygR
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
     regulatory      3638..4123
                     /label=trpC terminator
                     /note="trpC terminator"
                     /regulatory_class="terminator"
     primer_bind     4132..4148
                     /label=SK primer
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     primer_bind     complement(5444..5460)
                     /label=KS primer
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     intron          5491..5624
                     /note="CUT intron"
     terminator      5829..6393
                     /label=trpC terminator
                     /note="transcription terminator from the Aspergillus
                     nidulans trpC gene"
     promoter        complement(6413..6431)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     primer_bind     complement(6441..6457)
                     /label=M13 fwd
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      6599..7054
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"