质粒编号
质粒名称
规格
价格
V024920
pCAGGS-OR56A3(human)-EGFP-Strep-Tag II
100 μg (转染级)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pCAGGS-OR56A3(human)-EGFP-Strep-Tag II
- 载体抗性:
- Ampicillin
- Refseq ID:
- NM_001003443.3
- 载体长度:
- 6497 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 筛选标记:
- EGFP
- 启动子:
- CAG
- 载体标签:
- EGFP-Strep-Tag II
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Homo sapiens olfactory receptor family 56 subfamily A member 3 (OR56A3), mRNA
pCAGGS-OR56A3(human)-EGFP-Strep-Tag II 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCAGGS-OR56A3(human)-EGFP-Strep-Tag II 载体序列
LOCUS V024920 6497 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION V024920
VERSION V024920
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
enhancer 4..383
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
/label="CMV enhancer"
promoter 386..661
/label="chicken β-actin promoter"
intron 662..1674
/note="chimera between introns from chicken β-actin and
rabbit β-globin"
/label="chimeric intron"
regulatory 1681..1690
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
/regulatory_class="other"
/label="Kozak sequence"
CDS 1690..1755
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG® epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/transl_table=1
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
/label="3xFLAG"
CDS 1762..2706
/label="OR56A3(NM_001003443)"
/note="OR56A3(NM_001003443)"
/gene="OR56A3"
CDS 2713..2733
/codon_start=1
/product="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
/transl_table=1
/translation="ENLYFQS"
/label="TEV site"
CDS 2734..3447
/codon_start=1
/note="mammalian codon-optimized"
/product="the original enhanced GFP (Yang et al., 1996)"
/transl_table=1
/translation="V,SKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
/label="EGFP"
CDS 3448..3471
/codon_start=1
/product="peptide that binds Strep-Tactin®, an engineered
form of streptavidin"
/transl_table=1
/translation="WSHPQFEK"
/label="Strep-Tag II"
CDS 3490..3513
/codon_start=1
/product="peptide that binds Strep-Tactin®, an engineered
form of streptavidin"
/transl_table=1
/translation="WSHPQFEK"
/label="Strep-Tag II"
polyA_signal 3585..3640
/note="rabbit β-globin polyadenylation signal (Gil and
Proudfoot, 1987)"
/label="β-globin poly(A) signal"
primer_bind complement(4000..4016)
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
/label="M13 rev"
protein_bind 4024..4040
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/label="lac operator"
promoter complement(4048..4078)
/note="promoter for the E. coli lac operon"
/label="lac promoter"
protein_bind 4093..4114
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
/label="CAP binding site"
promoter 4173..4368
/note="SV40 early promoter"
/label="SV40 promoter"
polyA_signal 4374..4508
/note="SV40 polyadenylation signal"
/label="SV40 poly(A) signal"
rep_origin complement(4747..5335)
/direction=LEFT
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
/label="ori"
CDS complement(5506..6366)
/codon_start=1
/gene="bla"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/product="β-lactamase"
/transl_table=1
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFA,HPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEY
SPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDR
WEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRS
ALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGA
SLIKHW*"
/label="AmpR"
promoter complement(6367..6471)
/gene="bla"
/label="AmpR promoter"