基本信息
- 载体名称:
- pCDNA5-FRT-To-ADAM10(human)-FLAG
- 载体抗性:
- Ampicillin
- Refseq ID:
- NM_001110.4
- 载体长度:
- 7417 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 筛选标记:
- Hyg
- 启动子:
- CMV/To
- 载体标签:
- FLAG
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 30℃
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Homo sapiens ADAM metallopeptidase domain 10 (ADAM10), transcript variant 1, mRNA
产品信息
质粒编号:V028870
质粒名称:pCDNA5-FRT-To-ADAM10(human)-FLAG
规格:100 μg (转染级)
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RefSeq / 转录本
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
人ADAM10 ORF 克隆 (NM_001110) (编号: V028870)序列
LOCUS V028870 7417 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION V028870
VERSION V028870
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
enhancer 235..614
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
/label="CMV enhancer"
promoter 615..818
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
/label="CMV promoter"
protein_bind 820..838
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/gene="tetO"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
/label="tet operator"
protein_bind 841..859
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/gene="tetO"
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
/label="tet operator"
regulatory 1002..1011
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
/regulatory_class="other"
/label="Kozak sequence"
CDS 1011..1034
/codon_start=1
/product="FLAG® epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/transl_table=1
/translation="DYKDDDDK"
/label="FLAG"
CDS 1038..1061
/codon_start=1
/product="FLAG® epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/transl_table=1
/translation="DYKDDDDK"
/label="FLAG"
CDS 1065..3308
/label="ADAM10(NM_001110)"
/note="ADAM10(NM_001110)"
/gene="ADAM10"
polyA_signal 3375..3599
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
/label="bGH poly(A) signal"
protein_bind 3883..3930
/bound_moiety="FLP recombinase from the Saccharomyces
cerevisiae 2μ plasmid"
/note="FLP-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence TCTAGAAA (Turan and Bode, 2011)."
/label="FRT"
CDS 3938..4960
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/note="confers resistance to hygromycin"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/transl_table=1
/translation="KKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRGY
VLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLPE
TELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQT
VMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMFG
DSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDGN
FDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAKE
*"
/label="HygR"
polyA_signal 5090..5211
/note="SV40 polyadenylation signal"
/label="SV40 poly(A) signal"
primer_bind complement(5260..5276)
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
/label="M13 rev"
protein_bind 5284..5300
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/label="lac operator"
promoter complement(5308..5338)
/note="promoter for the E. coli lac operon"
/label="lac promoter"
protein_bind 5353..5374
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
/label="CAP binding site"
rep_origin complement(5662..6250)
/direction=LEFT
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
/label="ori"
CDS complement(6421..7281)
/codon_start=1
/gene="bla"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/product="β-lactamase"
/transl_table=1
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFA,HPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEY
SPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDR
WEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRS
ALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGA
SLIKHW*"
/label="AmpR"
promoter complement(7282..7386)
/gene="bla"
/label="AmpR promoter"