基本信息
- 载体名称:
- pBiT2.1-HMGB1(human)
- 载体抗性:
- Ampicillin
- Refseq ID:
- NM_002128.7
- 载体长度:
- 4026 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 启动子:
- TK
- 5'引物:
- HSV-F1：GGTCCCAGGTCCACTTCGC
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Homo sapiens high mobility group box 1 (HMGB1), transcript variant 2, mRNA
产品信息
质粒编号:V029781
质粒名称:pBiT2.1-HMGB1(human)
规格:100 μg (转染级)
下载资源
克隆选择
RefSeq / 转录本
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
人HMGB1 ORF 克隆 (NM_002128) (编号: V029781)序列
LOCUS pBiT2.1-HMGB1(human) 4026 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION V029781
VERSION V029781
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
promoter 28..779
/note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
/label="HSV TK promoter"
regulatory 809..818
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
/regulatory_class="other"
/label="Kozak sequence"
CDS 893..1537
/label="HMGB1(NM_002128)"
/note="HMGB1(NM_002128)"
/gene="HMGB1"
polyA_signal 1580..1701
/note="SV40 polyadenylation signal"
/label="SV40 poly(A) signal"
rep_origin complement(2120..2708)
/direction=LEFT
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
/label="ori"
CDS complement(2908..3768)
/codon_start=1
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/product="β-lactamase"
/transl_table=1
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFA,HPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEY
SPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDR
WEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRS
ALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGA
SLIKHW*"
/label="AmpR"
polyA_signal 3873..3921
/note="synthetic polyadenylation signal"
/label="poly(A) signal"
misc_feature 3935..4026
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human α2 globin gene"
/label="pause site"