质粒编号
质粒名称
规格
价格
V033739
pEF1a-Pml(mouse)-tdTomato-Neo
100 μg (转染级)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pEF1a-Pml(mouse)-tdTomato-Neo
- 载体抗性:
- Kanamycin
- Refseq ID:
- NM_178087.5
- 载体长度:
- 8760 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 筛选标记:
- Neo/G418;tdTomato
- 启动子:
- EF1a
- 5'引物:
- PEF-F
- 载体标签:
- tdTomato
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Mus musculus promyelocytic leukemia (Pml), transcript variant 2, mRNA
pEF1a-Pml(mouse)-tdTomato-Neo 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pEF1a-Pml(mouse)-tdTomato-Neo 载体序列
LOCUS V033739 8760 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION V033739
VERSION V033739
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
promoter 123..1301
/note="strong constitutive promoter for human elongation
factor EF-1α"
/label="EF-1α promoter"
CDS 1352..4006
/label="Pml(NM_178087)"
/note="Pml(NM_178087)"
/gene="Pml"
CDS 4037..5467
/codon_start=1
/note="mammalian codon-optimized"
/product="tandem dimeric (pseudo-monomeric) derivative of
DsRed (Shaner et al., 2004)"
/transl_table=1
/translation="MVSKGEEVIKEFMRFKVRMEGSMNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTA
KLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGG
LVTVTQDSSLQDGTLIYKVKMRGTNFPPDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGEIH
QALKLKDGGHYLVEFKTIYMAKKPVQLPGYYYVDTKLDITSHNEDYTIVEQYERSEGRH
HLFLGHGTGSTGSGSSGTASSEDNNMAVIKEFMRFKVRMEGSMNGHEFEIEGEGEGRPY
EGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVM
NFEDGGLVTVTQDSSLQDGTLIYKVKMRGTNFPPDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGV
LKGEIHQALKLKDGGHYLVEFKTIYMAKKPVQLPGYYYVDTKLDITSHNEDYTIVEQYE
RSEGRHHLFLYGMDELYK*"
/label="tdTomato"
polyA_signal 5601..5722
/note="SV40 polyadenylation signal"
/label="SV40 poly(A) signal"
rep_origin complement(5729..6184)
/direction=LEFT
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
/label="f1 ori"
promoter 6211..6315
/gene="bla"
/label="AmpR promoter"
promoter 6317..6674
/note="SV40 enhancer and early promoter"
/label="SV40 promoter"
CDS 6709..7503
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin®)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/transl_table=1
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
/label="NeoR/KanR"
polyA_signal 7735..7782
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
/label="HSV TK poly(A) signal"
rep_origin 8111..8699
/direction=RIGHT
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
/label="ori"