摘要:本文旨在通过原核表达获得猪磷酸酪氨酸互作结构域1(pPID1)重组蛋白,并制备pPID1多克隆抗体。将pPID1基因插入pET28a(+),构建重组pET28a(+)-pPID1大肠杆菌表达质粒,然后将重组质粒pET28a(+)-pPID1转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,获得的重组子以不同异丙基硫代--D-半乳糖苷(IPTG)浓度、温度和时间诱导,确定pPID1融合蛋白表达的最适条件。将表达产物经镍离子-亚氨基二乙酸(Ni2+-IDA)亲和层析纯化后进行基质辅助激光解析电离飞行时间质...
查看详情选择多克隆抗体还是单克隆抗体？ 一般来说，多抗识别的表位多，即使Target抗原有些表位被破坏，它仍然可以被多抗识 别，但是对于单抗来说就需要很小心了，因为它所识别的那一个表位被遮盖或被修饰时很可能不能与它对应的单抗反应，所以从这个角度来看，多抗是一个比较保险 的选择。但是单抗也有独到的地方，例如它更容易实验特异性，尤其是家族成员结构类似的时候，特异的单抗可以将它们分开。单抗的另一个优点就是容易实现批次 的稳定性，这个对于将来需要长期研究一个特定的target的朋友非常重要，比如某个抗体可以识...
查看详情DNA甲基化是一类基因组核酸序列未改变的功能性修饰，它是一种常见的表观遗传学现象。在过去的几十年中，人们对于产生DNA甲基化的各种遗传和环境因素及其生物学效应已经进行了广泛而深入的研究。继人类基因组计划结束后，于2003年，人类表观基因组协会(Human Epigenome Consortium,HEC)启动人类表观基因组计划(human epigenome project,HEP)，旨在识别和分类人类基因组中甲基化变异位点(methylation variable positions，MVP...
查看详情手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种地方流行病,主要发病人群为儿童,重症患者可表现为脑炎,无菌性脑膜炎等多种与神经相关的疾病。手足口病的其中一种主要 的病原体是肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71),1969年在美国加利福尼亚首次分离出EV71,它是小RNA病毒病毒科的一员,无包膜,其基因组为一条大小约为7.4kb的正义单链 RNA。EV71型病毒基因组编码四个结构蛋白,分别为VP1、VP2、VP3、和VP4,构成原聚体,该原聚体再...
查看详情原文作者：关建洪? 朱乐乐? 林欣? 贾鑫明 文章来源：《同济大学学报(医学版)》 2014年02期 C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CLR)是一类模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),可以识别病原体细胞壁上的糖成分,在抗真菌免疫中发挥重要作用。Dectin-2(dendritic cell associated C-type lectin-2)和Dectin-3(dendritic cell associated C-t...
查看详情基因组DNA的抽提，一般不会用到质粒抽提的试剂盒，究其原因是由于两者的原理完全不同。两者不都是DNA抽提么？其实关键在于这两者在实验的初始设计上就完全不同。先给大家解释一下质粒抽提吧。 ?? ?质粒抽提 质粒抽提通常用的是碱裂解法，一般的试剂盒都会有Solution I，Solution II，Solution III，有的还会有SolutionIV，然后是过柱子。 ?? ?Solution I一般都是用来重悬菌液的，会加入RNase I，降解掉里面大肠杆菌的RNA。同时里面还会用Tris...
查看详情“自杀质粒”（suicide plasmid） ? 这是最早的敲除方法，也就是通过同源整合的方式定点将基因敲除的方法。 ? 原理：自杀质粒通常为R质粒的衍生质粒，常有宿主范围广的特点，具有接合转移基因。它的复制需要一种特殊的蛋白，大多数细菌不产生这种蛋白质，因此，当进入寄主细胞时，要么不能复制，被消除，要么被整合入染色体上，和染色体一起复制。 ? ? 利用自杀质粒的这个特点，将基因工程技术构建的基因缺失的DNA片断，克隆入自杀质粒，利用缺失基因两端的同源片断，定位自杀质粒的整合位点。利...
查看详情一、自噬过程：根据胞内底物运送到溶酶体的方式不同，哺乳动物细胞自噬可分为三种主要方式：巨自噬(Macroautophagy)，微自噬(Microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(Chaperone-mediatedautophagy)。 通常我们研究的是巨自噬，包括：信号刺激，吞噬泡的形成，吞噬泡与内含体/溶酶体的融合，内容物的降解以及降解产物的释放。一方面，在正常条件下，mTOR高磷酸化Atg13抑制其活性。而mTOR的抑制信号，导致Atg13去磷酸化，形成ULK1(Atg1)-A...
查看详情增殖markers 促增殖：Ki67, ERK1/2, p38, JNK, AKT, PCNA, p70S6K细胞周期markers G0/G1期：CDK4, CDK6, Cyclin D; CDK2,Cyclin E G2/M期：phospho-p53, p53, p21, p27,cyclin B1, phosphor-cdc2, cdc2, phospho-cdc25c, cdc25c CDK4,CDK6, Cyclin D1促G1进展；CDK2, Cyclin E促G1-S过渡；CDC2...
查看详情目前，在我国奶牛养殖业中，penicillin和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商 户滥用抗生素以及未严格遵守休药期，致使牛奶中抗生素残留超标，乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限量抗生素的原料乳实施 标准控制。国内多数乳品企业对抗生素残留超标的牛乳采取降价收购或不收购，而一些不法奶站使用一些生物制剂降解牛乳中残留的抗生素，生产出人造"无抗 奶"。经过调研，初步判断市售生物制剂的主要成分是β-内酰胺酶，它是由革兰...
查看详情
