1.  将10 ml 经CNBr活化Sepharose 4B溶胀于1 mmol/l HCl中，然后转移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶联缓冲液各连续洗涤不少于30 min。 2.  将Sepharose凝胶转移至50 ml 锥形塑料离心管中，加50~100 mg 的配体，混匀后4℃静置过夜。 3.  250 g 离心10 min，弃上清，加偶联缓冲液至...

1.  将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。 2.  腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A 280 监测。 ...

1.  用20G或22G的注射针，小鼠腹膜内注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接种细胞。 2.  在175 cm 2 培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培养液，进行杂交瘤细胞的培养，使细胞生长至对数期。 3.  将培养液转入50 ml 锥形离心管中，室温下500 g 离心5 min。 4.  细胞重悬于50 ml 无菌的PB...

1.  同备择方案1中大规模制备MAb上清的步骤1~4，但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞，或者是在细胞生长的平台期收获。 2.  将细胞倒入无菌的250 ml 锥形离心管中，于4℃ 250 g 离心15 min，弃上清。 3.  置细胞沉淀于冰上，重悬细胞于4℃250 ml 的PBS，于4℃250 g 离心，弃上清。 4.  重复以上步骤，最终把细胞合并到一管中，细胞经过3次冼涤后，可...

1.  重复基本方案1步骤1，按1：10分传到终体积100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。 2.  准备传代细胞时，应将175 cm 2 培养瓶中的内容物（100 ml）转移到—个850 cm 2 旋转培养瓶中，另加150 ml 完全DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，置于转瓶培养装置上于37℃培养1~2天。 ...

1.  将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm 2 组织培养瓶中，置37 ℃CO 2 培养箱中，直至生长旺盛适于分传。 2.  按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm 2 的培养瓶中，加入完全DMEM-10培养液到总液量为100 ml，并置CO ...

1.  透析5 mg/ml 抗体溶液，除使用PBS之外，其方法与基本方案中的步骤1完全相同。透析完毕，将抗体溶液置于一个试管中，并测A 280 处吸光度。用PBS将其稀释至3 mg/ml。 2.  往一个1. 5 ml 的微量离心管中加入3 mg/ml 的抗体溶液100 碱性磷酸酶90 μl。再加入5 μl 的25%戊...

1.  浓度≥1 mg/ml 抗体溶液对2 l 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液透析，于4℃缓慢摇动下过夜。 2.  10 mg HRPO溶解于1 ml 0.1 mol/l pH9.2的碳酸盐缓冲液，取0.25 ml 加入0.25 ml 新配制的NaIO 4 溶液中，盖紧混匀，于室温下避光放置2 h。 3.  取透析后的抗体溶液1 ml。加至...

1.  在20 μl 反应体积中，用限制性内切酶消化0.1~4 μg DNA。 2.  加入1 μl 0.5 mmol/l 含各种dNTP的混合液，并加入1~50 U 的klenow酶，30℃温育15 min。 3.  75℃加热10 min或者加入1 μl 0.5mol/l EDTA以终止反应。 ...

在保持组蛋白和DNA联合的同时，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，染色质被切成很小的片断，并沉淀下来。 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。 目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。 一、染色质免疫共沉淀简介 ...