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兔多克隆抗血清的制备实验-备选方案(皮下组织注射免疫法)

1.  准备用于注射家兔的抗原,并准备用于皮下注射免疫的家兔(方法同皮内注射)。 2.  将家兔背部皮肤捏出,以远离其下的肌肉,用24G注射针头全程穿剌,进入皮下,小心勿刺入肌肉组织中,在4个不同的部位各注射0.5 ml 抗原。 3.  用不完全弗氏佐剂进行家兔肌肉内法射以加强免疫(见基本方案)或者采用皮下组织注射,方法同上。 ...

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兔多克隆抗血清的制备实验-备选方案3(耳动脉放血)

1.  准备用于放血的家兔(见基本方案) 2.  将靠近家兔头部的半只耳朵托在梅指和食指上,用中指和无名指弯曲剩余的半只耳朵使之下垂,以便使血液随重力下流,用一个18G注射用针头(不带注射器)沿着兔耳中动脉进针,针尖指向兔耳根部。 3.  进针后,将注射用针头推进5~10 min,小心勿伤及动脉血管壁,用一支50 ml 的塑料离心管收集兔血(见基本方案),之后出针止血,并包扎兔耳。 ...

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IgG抗体纯化实验-基本方案

1.  于4℃不断搅拌下,往2体积的含有IgG的混合物中,逐滴加入1体枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不间断地搅拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 离心20 min。 2.  用预冷的33% SAS溶液在漩涡混合器上振荡洗涤沉淀,所用溶液的体积与原含IgG的混合物等体积。 3.  在旋涡混合器上温和振荡以将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中(5%~10%的原始体积)。4℃透析IgG溶液48 h以上,期间...

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IgG抗体纯化实验-备选方案

1.  准备好一根DEAE-Affi-Gel Blue柱子。用5倍柱床体积的加样缓冲液平衡(7 ml 柱床体积/ml 抗血清或腹水)。此步骤及以下各步均在4℃下操作实施。 2.  于4℃下透析样品40 h,中间换2次加样缓冲液(每次换大约4 L)加样上柱,速度为10 ml/h。用3倍柱床体积的加样缓冲液以10 ml/h 的速度洗脱未结合的蛋白质。 3.  用洗脱缓冲液以10 ml/h 的速度洗脱结合的IgG组分,...

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抗肽抗体的制备实验-基本方案

1.  将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中,置于一个2 ml 的玻璃试管,加50 μl MBS/DMF溶液,于室温下温和搅拌30 min。 2.  加样到PD-10柱子上,上柱前用10 ml 的0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液预平衡柱子。 3.  上样后每0.6 ml 加I为一组分分部收集洗脱液,监测A 280 ...

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抗肽抗体的制备实验-备选方案

1.  将10 mg 的血蓝蛋白溶于2 ml pH10的硼酸缓冲液中,置于15 ml 的玻璃试管中,温和振摇。 2.  加10 μmol 的合成肽。 3.  缓慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液,于室温下振摇。 4.  使其反应2 h(溶液将变成黄色)。 5.  加0.25 ml 的1 mol/l 甘氨酸以封闭未反应的戊二醛,使其反应30 min。 ...

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免疫相关的细胞形态的观察实验

瑞特氏染色: 1.  染色液配置 称取瑞特氏染料0.1克溶于60 ml 甲醇中,过滤。贮褐色瓶中备用。(配置时,要先将瑞特氏染料置研钵体内边研边滴加甲醇,使染料溶液得更好。) 2.  瑞特氏染色法: 取小鼠骨动脉血,涂制玻片。干后用玻璃笔在涂处之两侧划线(限制染液流掉)。于划线内部滴加染液3~4滴,经3~5分钟后,再滴加等量的蒸馏水,轻轻晃动混合。经5分钟后,用蒸馏水洗...

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环状沉淀反应实验

当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。 1.  取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第一管,加时注意不能有气泡。 2. 以毛细吸管吸取生理盐水0.2毫升加入第二管。 3. 用毛细吸管吸入血稀释0.2毫升加入各管,加时应注意使抗原溶液缓缓由管壁流下,轻浮于血清面上,使成一明...

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T4 DNA聚合酶实验

一、缓冲系统的相容性 许多限制性内切酶能在T4 DNA聚合酶的缓冲系统进行切割反应,同时,T4 DNA 聚合酶也能直接使用。 二、应用 1.  放射性标记DNA片段的3’末端,含5’凸出端的DNA片段及浓度为1~2 μmol/l 的适当[α-32P]dNTP,在11℃温育20 min。 2.  选择性及无选择标记线性化双链DNA分子的3’宋端...

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直接凝集反应实验-玻片凝集反应

1.  取清洁玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。无菌操作下,用接种环于1、2格内加1:10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴,第三格加1~2滴生理盐水。 2.  无菌操作下,用接种环取伤寒杆菌培养物少许,混于第三格中,再混于第一格中(不能先混第一格再混第三格,因为这样将使诊断血清混入盐水而影响对照结果),将细菌与盐水或血清混合均匀使呈乳状液。此时取菌量不可过多,使悬液呈轻度乳浊即可。 3.  同法取枯草杆菌培养物少许,...

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