单克隆抗体上清的制备实验-基本方案1
1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm 2 组织培养瓶中,置37 ℃CO 2 培养箱中,直至生长旺盛适于分传。 2. 按1:10的比例将细胞分传到一个新的175 cm 2 的培养瓶中,加入完全DMEM-10培养液到总液量为100 ml,并置CO ...
查看详情1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm 2 组织培养瓶中,置37 ℃CO 2 培养箱中,直至生长旺盛适于分传。 2. 按1:10的比例将细胞分传到一个新的175 cm 2 的培养瓶中,加入完全DMEM-10培养液到总液量为100 ml,并置CO ...
查看详情1. 重复基本方案1步骤1,按1:10分传到终体积100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。 2. 准备传代细胞时,应将175 cm 2 培养瓶中的内容物(100 ml)转移到—个850 cm 2 旋转培养瓶中,另加150 ml 完全DMEM-10/HEPES,盖紧瓶盖,置于转瓶培养装置上于37℃培养1~2天。 ...
查看详情1. 同备择方案1中大规模制备MAb上清的步骤1~4,但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞,或者是在细胞生长的平台期收获。 2. 将细胞倒入无菌的250 ml 锥形离心管中,于4℃ 250 g 离心15 min,弃上清。 3. 置细胞沉淀于冰上,重悬细胞于4℃250 ml 的PBS,于4℃250 g 离心,弃上清。 4. 重复以上步骤,最终把细胞合并到一管中,细胞经过3次冼涤后,可...
查看详情1. 用20G或22G的注射针,小鼠腹膜内注射降植烷,每只鼠0.5 ~ 1 ml,1周后接种细胞。 2. 在175 cm 2 培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培养液,进行杂交瘤细胞的培养,使细胞生长至对数期。 3. 将培养液转入50 ml 锥形离心管中,室温下500 g 离心5 min。 4. 细胞重悬于50 ml 无菌的PB...
查看详情1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中(超过50倍的量,v/v)充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中,用Tris缓冲液使其平衡。 2. 腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液,以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱,用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱,采用A 280 监测。 ...
查看详情1. 将10 ml 经CNBr活化Sepharose 4B溶胀于1 mmol/l HCl中,然后转移至玻璃沙漏斗中,并用:①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶联缓冲液各连续洗涤不少于30 min。 2. 将Sepharose凝胶转移至50 ml 锥形塑料离心管中,加50~100 mg 的配体,混匀后4℃静置过夜。 3. 250 g 离心10 min,弃上清,加偶联缓冲液至...
查看详情1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只手托住兔的后腿及臀部,将兔束紧固定以使后肢不能伸张,用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒,在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深,毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。 3. 四周后,用1 ...
查看详情此法是一种用以产生高放射比活、放射标记均匀分布的04八片段的切口平移方法。 1. 用合适的限制性内切酶消化DNA,DNA片段经电泳纯化或乙醇沉淀,用TE缓冲液重悬。 2. 在冰浴中混合下列物质: (1)2.5 μl 0.5mmol/l 3dNTP混合液 (2)2.5 μl 10×klenow酶缓冲液 (3)5 μl 3000Ci/mmol...
查看详情1. 按基本方案中步骤1制备免疫兔用的抗原。 2. 牢牢地抓住兔子,剃除其背毛,用70%乙酵消毒其暴露的皮肤。用拇指和食指将需要免疫注射的区域的皮肤张开,用3 ml 注射器带24G注射针头以相对皮肤30 。 的角度进针(针尖的斜面朝上),进针深度只达外皮层之下。放低注射器,使之平放在兔的背部上,将≤100 μl 的乳化抗原注射进真皮层间,与前操作相同,分别在兔的背部选择其他4个部位,并注射不大于...
查看详情1. 准备用于注射家兔的抗原,并准备用于皮下注射免疫的家兔(方法同皮内注射)。 2. 将家兔背部皮肤捏出,以远离其下的肌肉,用24G注射针头全程穿剌,进入皮下,小心勿刺入肌肉组织中,在4个不同的部位各注射0.5 ml 抗原。 3. 用不完全弗氏佐剂进行家兔肌肉内法射以加强免疫(见基本方案)或者采用皮下组织注射,方法同上。 ...
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