一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置60℃ 1 小时）。 （1）二甲苯I、II,各10 分钟。 （2）梯度酒精：100%，2 分钟® 95%，2 分钟® 80%，2 分钟® 70%2 分钟。 （3）蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2，室温10 分钟（避光）。 ...

1.  用过氧化物酶，蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。 2.  配置如下一步反应体系（总体积100 μl） （1）0.5 μl 100 μmol/l 正向引物（终浓度0.5 μmol/l） （2）0.5 μl 100 μmol/l 反向引物（终浓度0.5 μmol/l） （3）6 μl 3 mmol/l 4dNTP混合物（终浓度0.12 mmol/l） ...

1.  生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭，然后与链亲和素溶液温育（“辣根过氧化物酶法检测”，步骤1~4）。 2.  由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片，吸去残液，勿使玻片干燥，加200 μl 生物素酰化碱性磷酸酶溶液于玻片上，加盖24 mm×60 mm 盖玻片。放入外裹以铝箔的加湿盒中， 置37℃温育30 min。 3.  从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑去，将载玻片放入盛有42℃ 0.1% Tween...

1.  以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“”基本方案1~6步）。 2.  由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上，放24 mm×60 mm 的盖玻片于封阻液上，将载玻片放于裹以铝箔的加湿盒中，置37℃温育30 min。 3.  从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑掉，尽可能吸去残留封阻液，但不使玻片干燥， 加200 μl 链亲和素液于载...

1.  用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片（见“”基本方案步骤1~6）。 2.  加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm 2 大小的Parafilm 膜，置37℃温育30 min。 3.  移去Parafilm 膜，分别在4×SSC、0.1% Triton X-100/4×SSC、4×SSC中洗片，每次15 min。 ...

1.  用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过夜。 2.  将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用最适的时间交联。 3.  用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。 4.  杂交后、将膜置于杂交袋中。 5.  封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。 6....

1.  用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤，进行第一轮杂交信号检测。 2.  如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油，移去盖玻片， 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Triton X-100/4×SSC 15 min，并轻摇。盛液的Coplin 广口瓶外裹以铝箔以避光，如盖玻片不易松动，应小心去除，重复洗涤2次。 3.  吸去载玻片上残余溶液，在载玻片上加50 μl 的1~3 μg...

1. PBS 溶解抗原为30 μg/ml，加100 μl/孔于PVDF 膜铺底的96 孔灭菌板过夜； 2. 第二天吸去包被液后，加5％FCS 的PRMI 1640 培养基100 μl 封闭1 小时，37℃； 3. 准备脾细胞悬液（用氯化铵去除红细胞，制备成单个脾淋巴细胞悬液）； 4. 从1 × 106/孔开始，按1:3 的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度，并做3 个复孔，37 ℃静置培养5 小时；...

一、E.coli/phage裂解液预吸附血清 1. 将E.coli /phage lysate 以1:10-20 稀释在TBST 溶液中。 2. 将4 张82mm 的nitrocellulose membranes（NC）浸入稀释后的E.coli/ phagelysate 中，室温下水平摇动30 分钟，取出NC 并使膜沥干。 3. 用50ml TBST 溶液洗膜3 次，每次10 分钟。 ...

1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2.  待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。 3.  室温下在含0.25%过氧化氢的PBS中温育30 min，以PBS洗3次。 4.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片上加40~50...