1.  在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至总体积为34 μl。 2.  在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。 3.  按顺序加入下列溶液： （1）10 μl  生物素酰化随即多聚体 （2）5 μl  dNTP/生物素混合物 （3）1 μl  klenow酶（5U） ...

PAP 的基本原量是在间接法的基础上，即在加完酶标二抗以后，再加一个 PAP 复合物（过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物）。PAP 复合物为由3 个酶分子和2 个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物，其稳定性很强，冲洗时不会脱落。在这种方法 中，PAP 复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法 更为灵敏，而且背景染色体。 1.  标本固定后，...

这种方法可在复合物体系中连接更多的PAP复合物，对抗原可进一步放大，因此灵 敏度更为增强，适用于微量抗原的检测。 1.  标本固定后，PBS洗涤； 2.  1 %H 2 O 2 （或1 %H 2 O ...

由于卵白素与生物素具有高度亲和力，可形成卵白素-生 物素-过氧化物酶复合物（ABC复合物），ABC 复合物与生物素化二抗结合，最后形成抗 原-抗体-生物素体二抗-ABC复合物。该方法比单PAP法灵敏，背景染色低，受到广大研 究工作者的观迎。 1.  标本固定后，PBS洗涤； 2.  1 %H 2 ...

一、试管法 肝素抗凝血0.1 ml 滴于小试管底部，再加入等量NBT应用液 ↓ 37℃，30分钟（中间摇动一次），再置室温15分钟 ↓ 摇匀，用毛细管取一滴放于玻片一端，做血涂片 ↓ 立即用电吹风吹干，甲醇溶液固定1分钟，10 g/L 沙黄水溶液染色5分钟 ↓ ...

一、操作过程 小鼠腹腔注射10 g/L 淀粉溶液2 ml ↓ 24 h 后，小鼠腹腔注射2%鸡红细胞1 ml ↓ 30 min 后，小鼠脱臼处死，腹腔内注射0.2 ml 肝素注射液，揉动腹部 ↓ 毛细管吸取腹腔液，滴一滴于玻片上，将毛细管平放于液滴上展开液滴，自然干燥 ↓ ...

一、材料准备 1.  斑蟊浸液制备：斑蟊以95%乙醇溶液制成10%酊剂，室温下浸泡2周后使用。 2.  人巨噬细胞的获取：取滤纸片蘸斑蟊酊，置于一侧前臂皮肤上，在滤纸片上盖一塑料片，再以清洁纱布固定4~5小时，取下滤纸片，再用塑料瓶盖将局部罩上，以防形成的水疱破裂，48小时即可形成完整的水疱。 二、实验步骤 取水疱渗出液0.5 ml，加5%鸡红细胞悬液...

IL-1与小鼠胸腺细胞共同培养时，IL-1可刺激小鼠胸腺细胞增殖。进一步通过3H-TdR掺入法或染料摄入法判定小鼠胸腺细胞增殖量，推定IL-1的生物学活性。通过检测IL-1的生物学活性，可了解单核-巨噬细胞等的功能。 1.  小鼠巨噬细胞产生IL-1的诱导 （1）常规收集小鼠腹腔巨噬细胞，10%FCS-IMDM培养液悬浮细胞2×10 6 /ml，接种于24孔培养板，0.5 ml...

一、人外周血T细胞分泌IL-2的诱生 1.  人PBMC分离：采用常规淋巴细胞分层液浓度梯度离心法分离PBMC，用10%FCS-RPMI-1640培养液调整细胞浓度为 2.  加样：接种细胞悬液于24孔培养板，每孔0.51 ml，每孔再加PHA 0.5 ml，37度，5%CO 2 孵育48小时。 3.  回收上清：吸出细胞培养上清，1200...

一、IL-4生物学活性测定 CT.4S细胞悬液制备① ↓ 接种细胞于96孔培养板② ↓ 加待测样品和标准品③ ↓ 加3H-TdR④ ↓ 收集细胞，测定3H-TdR掺入量⑤ ↓ 绘制标准曲线，计算待测样品的IL...