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工程菌高密度发酵

发酵工业是既古老又崭新的工业,它的形成经历了漫长的岁月。随着科学技术的发展,发酵工业不断地得到发展和充实。现代发酵工业就是传统的发酵技术与现代DNA重组、细胞融合等新技术相结合,而发展起来的现代生物技术,并通过现代化学工程技术生产有用物质或直接用于工业化生产的一种大工业体系,是生物技术的重要组成部分。   发酵工业在基因工程药物的研制方面起着不可替代的作用。重组DNA技术和大规模培养技术的有机结合,使得原来无法大量获得的天然蛋白特别是基因工程药物能够大量生产,应用于...

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重组病毒的蛋白质分析实验

1.  接种2.5×10 8 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm 2 培养瓶中,27℃温育≥ 2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml 病毒贮液中取0.5 ml 分别加入各个培养瓶。4℃保存剩余的0.5 ml 重组病毒,待以后用于蚀斑试验。 2.  培养瓶置27℃温育4~5天,毎天检查感染迹象。...

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裸眼筛选重组杆状病毒实验

解剖显微镜下筛选 1.  倒转蚀斑平皿,使其处于显微镜的黑色背景下,以锐角向平皿照射一束亮光。 2.  检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑,这种蚀斑看上去折光性强,带有轻微的黄色。 3.  检查β-gal 重组病毒感染的细胞中不含包涵体的蚀斑,其颜色呈灰色。 4.  圈出平皿中覆盖蚀斑的区域,以400×的倍数在倒置显微镜下检查圈出的蚀斑,以...

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重组杆状病毒的纯化实验

1.  制备病毒上清的系列稀释液,该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2.  当蚀斑形成后,用灭菌巴斯德吸管挑取一个分离较好的蓝色蚀斑,并将琼脂糖块移入 一支含有1 ml 无血清完全培养液的无菌试管中。在旋涡混合器上剧烈篱荡,并用无血清完全培养液制备10 -1 、10 ...

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DNA片断的酶切实验

一、EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ单酶切及双酶切 1.  取2支干净、灭菌新Eppendof管,分别按下表加入 A(μl) B(μl) 灭菌水 13 13 EcoR Ⅰ缓冲液 ...

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梅毒的血清学实验-玻片定量试验

玻片定性试验阳性和弱阳性者都必须做定量试验,以便了解抗体效价高低,抗体升降情况及排除假阳性。 将原待检血清作对倍稀释,稀释度为1:2至1:32。每个稀释度取0.05ml加在玻片圆圈中,按定性试验进行测定和判读结果。以最高稀释度达到+++~++++ 者作为效价。 注意事项 ①抗原自冰箱取出后要恢复至室温再用; ②试验力求在23 ℃~29 ℃环境下进行; ...

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梅毒的血清学实验-玻片定性试验

不加热血清反应素试验USR(Unheated Serum Regin Test)是用牛心肌脂质作为抗原,测定病人血清中的反应素(抗脂质抗体)的一种非特异性梅毒血清学反应(即非螺旋体抗原试验),阳性率一期梅毒70%,二期梅毒100%。 取待检血清0.05 ml,加在玻片圆圈内。 用l ml注射器套上专用针头(针头无斜面,需垂直位置每ml 滴注4,5滴(1滴)吸取USR试剂,在每孔待测血清上滴加1滴。 用手或震荡...

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螺旋体形态及染色特征观察实验

观察梅毒的组织切片。用Fontana 镀银染色法染色。镜下可见螺旋致密而规则,约8~14个,两端尖直,螺旋体呈棕褐色,组织染成棕黄色。 钩端螺旋体纯培养涂片。用Fontana 镀银染色法染色。镜下可见一端或两端有钩,类似S型和C型的棕褐色螺旋体,螺旋不太清楚,菌体整齐,细粗均匀。 ...

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恙虫病立克次体形态观察实验

感染恙虫病立克次体的卵黄囊膜涂片,经姬姆萨染液染色。镜下可见到完整的及破碎的细胞,细胞核呈紫红色或紫色,细胞浆呈浅兰色,在细胞浆内或细胞外可见大量染成紫红色球杆状立克次体,两端常浓染,成堆密集在细胞核旁者多见。 ...

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人体结核菌素试验(OT 试验)

这是测知人体对结核杆菌蛋白有无迟发型超敏反应的一种皮内试验。用于间接了解人体是否感染过结核杆菌,对结核有无获得免疫力。如受试者曾受过结核杆菌感染或接种过卡介苗,则结核菌素可进入组织与致敏淋巴细胞特异性结合,在注射局部释放细胞因子,形成以单核细胞浸润为主的炎症反应,局部表现红肿,硬结,且直径在0.5cm 以上。 OT试验阳性反应表明机体对结核菌蛋白有超敏反应,间接说明对结核杆菌有一定的细胞免疫力,但对成人来说并不表明发病。三岁以下儿童结核菌素试验阳性则可认为...

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