1.  在实验四所得DNA限制性内切酶片段中加入 （1）10×碱性磷酸酶缓冲液  10 μl （2）碱性磷酸酶（0.01 u/pmol ends）  1-2 ul （3）ddH 2 O到100 ul （4）对于5‘突出则37℃下温浴30分钟，再加入1 ul CIAP（0.01 u/pmol ends），37℃下温浴30分钟。...

选择性培养是一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养，具有使混合菌中的劣势发展成优势菌的功能，故被广泛用于菌种筛选等领域。阿须贝氏（Ashby）无氮培养基是一种缺之结合态无机或有机氮源的培养基，可有效从土壤中分离自生固氮菌。阿须贝氏（Ashby）无氮培养基选择的原理是自生固氮菌在保证碳源（甘露醇或葡萄糖）和无机营养供应的情况下，可利用空气中的游离氮合成自身需要的含氮有机物，而其他各类微生物多无自生固氮能力，因此达到了选择性富集的效果。 ...

一、极限培养基平板 800 ml水加入15 g琼脂，高压灭菌15 min。然后加人200 ml无菌的5 X 极限培养液和碳源。待冷却至50°C，加人补充成分。每个10 cm平板倒入32~40 ml 培养基（每升培养基可制作25〜30个平板）。于室温干燥2〜3天，或将平板的上盖稍 微打开，于37°C或在层流通风橱干燥30 min，将晾干的平板包裹好储存于4°C。 二、丰富培养基平板 ...

乳酸菌都是一些兼厌氧菌，革兰氏阳性，杆状或球状，无芽孢，不运动，分解和合成能力较差，营养要求较高，需提供丰富的肽类、氨基酸和维生素，它们缺乏呼吸链成分、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，在琼脂培养基表面或内层只形成较小的白色或淡色菌落。常用的分离培养基有番茄汁碳酸钙琼脂培养基、麦芽汁碳酸钙琼脂培养基。分离方法有平板划线法或经适当稀释后进行涂布平板法。 一、配制番茄汁碳酸钙琼脂培养基 倒平皿，凝固后待用； ...

水中细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志，细菌数量越多，则水中有机质含量越大。本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。以1 ml水样在营养琼脂培养基中，于37 ℃培养24 h后所生长的细菌菌落的总数，作为水体受细菌污染程度的标志，我国规定1 ml自来水中细菌总数不得超过100个。 一、水样的采集与保藏 自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼 3 min...

酸奶发酵中主要的生物变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其H 降至酪蛋的等电点4.6 附近4.0—4.6从而使牛奶形成凝胶状；其次，乳酸菌还会促使部分酪蛋白降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和丁二铜等风味物质。这就是酸奶具有良好的 保健作用和适合广大乳糖不耐症患者饮用的主要原因。 一.配奶 用奶粉按1：7 比例加水配成还原奶，然后在牛奶中添加6 %-10 %白糖后搅匀，并置于85-90 ℃消毒15...

1.  糖化阶段：根霉的孢子在米饭基质上发芽后，迅速萌发出大量菌丝体，它们分泌的几种淀粉酶将基质中的淀粉水解为葡萄糖。 2.  酒精发酵阶段：由根霉和多种酵母菌继续将其中一部分葡萄糖转化为乙醇。 一、选好米料 选择优质糯米作发酵原料； 二、淘净浸透 糯米用清水淘净后浸泡12—24 h； 三、蒸煮熟透 用蒸笼...

在无氧条件下，酵母菌利用己糖发酵生成乙醇和CO2的作用，称为乙醇发酵。目前乙醇发酵所采用的微生物主要是酵母菌。生产上所使用的酵母菌原菌一般是固体斜面试管菌种，由于起酵母数量太少，不够生产之需，所以必须将斜面菌种进行若干次的扩大培养，以获得含有足够数量酵母菌的酵母培养物（通常是液体培养物，也有固体培养物的），以供乙醇发酵以用，故被称为酒母。 一、酵母菌的扩大培养 1.  培养基的制备 酵母扩大培养...

通过连续稀释法滴定和分离细菌菌落。 1.  在3个16~18 mm的无菌培养试管中各加人5 ml LB培养液。 2.  吸取5 μl细菌培养液加人1号试管中振荡5 S。 3.  接着从1号试管吸5 μl稀释液加入2号试管振荡摇匀，再从2号试管吸5 μl稀释液加人3号试管振荡摇匀。 4.  从每个试管中分别取100 μl菌液涂布于LB平皿上，并且做好...

本方法特别适合于PCR片段的回收，具有纯度高、操作简洁等特点，经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程，PCR产物即能被有效地从含引物二聚体、非特异性扩增引物片断等混合物中分离出来，成为高度无盐的、不含其他大分子成分的纯化片断。在较宽的分子量范围内有较高的回收效率。下表为不同长度的DNA片断，在室温条件下，用此纯化系统直接纯化时，各自相应的回收率。 一、从琼脂糖介质中纯化DNA片断 1.  用低熔...