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病毒的血清学实验-间接免疫荧光法检测人类巨细胞病毒早期抗原(HCMV-EA)

人类巨细胞病毒(HCMV)感染细胞后,经短期培养48~72 小时,可产生早期蛋白抗原(HCMV-EA),应用已知抗HCMV-EA的单克隆抗体(McAb-20 K)与之结合,再加入荧光素(FITC)标记羊抗人IgG 荧光抗体,在荧光镜下检查,可见细胞核内或胞浆内有黄绿色荧光。 将已经处理的待检尿液混合于人胚肺纤维母细胞(HEL)中,然后用4 号针头滴加于印有小孔的灭菌玻片上,放CO 2 孵育箱中,37 ℃短期培养...

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病毒的血清学实验-EB 病毒 VCA-IgA 试验

用带EB 病毒衣壳抗原的类淋巴细胞作抗原靶细胞,可与病人血清中的VCA--IgA 抗体结合,形成抗原抗体复合物,再与酶标抗人IgA 抗体结合,加入底物后酶催化底物变为有色产物,使靶细胞着色,产物的量与病人血清中的抗体量直接相关,故可根据颜色反应的深浅对抗体定量分析。 此法简便敏感,适于对人群普查鼻咽癌,有助于早期诊断鼻咽癌。 有助于诊断和鉴别诊断鼻咽癌:用VCA-IgA 试验检测鼻咽癌患者,抗体阳性率在90% 以上,抗体滴度1...

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DNA片段的回收实验-液氮冻融法

1.  紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中。 2.  离心1 min,加入500 ul TE,200 ul 酚/氯仿混匀。 3.  离心管放入液氮中10~15 min,再室温放置,反复冻融。 4.  用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。 5.  1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。 6.  70%...

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病毒的血清学实验-ELISA检测乙脑病毒早期特异性IgM抗体

将抗μ链球蛋白(豚鼠抗兔IgM 抗体)非特异地吸附在固相上,加入待检乙脑病人血清,血清中的IgM能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病(JBEV)抗原和酶标记的相应抗体(兔抗IBEV IgG)时,病人血清抗体再与IBEV抗原和酶标抗IBEV IgG 结合作用于酶底物,酶底物显色反应,借此可测出血中IgM 抗体的含量。 1.  用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 (g/ml,加至40 孔板,每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时,再...

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病毒的血清学实验-病毒红细胞凝集抑制试验

1.  取干净凹窝塑料板一块,用蜡笔做好标记,用带有橡皮吸头的吸管,于第2 至第9 孔内各加人生理盐水0.2 mL; 2.  于第1 ,第2 及第9 孔中各加入稀释成1:5 的流感病人发病早期血清0.2 ml (血清处理见附录),混匀后,从第2 孔吸出0.2ml 加入第3 孔,按同法稀释至第8 孔,吸出0.2 ml 弃去(血清稀释度分别为1:5~1:640)。 3.  在第1 至第8 孔中,各加入4血凝素单位流感病毒0.2...

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病毒的血清学实验-病毒红细胞凝集试验

有些病毒(如流感病毒等)表面有血凝素(为糖蛋白)在一定条件下,能与鸡,豚鼠的红细胞表面的糖蛋白受体结合而发生凝集现象。利用病毒血凝试验可以检测某些病毒的存在,滴定病毒的血凝效价,便可大致估计病毒颗粒的数量(1 个血凝单位=106病毒颗粒)。若血清中出现特异性抗体与相应病毒结合后,使病毒失去凝集红细胞的能力,从而抑制血凝现象的出现,此为血凝抑制现象。 1.  取一块洗净晾干的20 孔凹窝塑料板,用蜡笔做好标记。用带有橡皮吸头的吸管,于1~6 孔内各加人生理盐...

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病毒的培养方法实验-动物接种法

注意选择动物种类,年龄。按病毒侵袭部位的不同,选择适宜的接种途径,例如脑炎病毒以注射脑内最敏感。接种后经一定潜伏期,动物发病或死亡即进行解剖。根据动物的症状表现,器官病理改变,受染脏器组织悬液能在同种动物进行连续传代,并排除其他微生物污染的可能性等,即可证明有病毒的增殖。 以无菌0.25 毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1 毫升,去除注射器内的气泡。 取出小白鼠,左手将小白鼠固定,固定时用大拇指和食指握住小白鼠的头部,左手手掌轻轻按住小...

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病毒的培养方法实验-鸡胚培养法

鸡胚培养方法操作简便,适用于流感病毒,痘病毒,疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种,即绒毛尿囊膜接种法,羊膜腔(羊水囊)接种法,尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。 1.  鸡胚的检查 将9~11 日龄鸡胚置于检卵器上,照视观察鸡胚是否生活,根据①小血管是否清晰;②胚胎是否活动,观察小鸡的眼睛黑点是否移动。如果鸡胚不动,血管昏暗模糊,变黑或苍白都表示已死亡。 ...

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病毒的形态学诊断实验

1.  病毒的电镜图像观察 观察腺病毒,轮状病毒,单纯疱疹病毒的电镜照片,注意其形态,排列,大小及其结构。 2.  病毒包涵体的观察 用高倍镜或油镜观察经HE (苏木素伊红染色)染色的狂犬病毒及呼吸道合胞病毒(或麻疹病毒)感染宿主细胞后形成的包涵体,注意包涵体在细胞内的大小,形态,位置及染色性,并绘图表示。 ...

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DNA片段的回收实验-微量柱法

1.  紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中。 2.  离心管在-20℃冷却5~10分钟。 3.  将微量柱下套上一Epphendof管,将冷却的胶条装进微量柱中,4℃12 000 rpm 离心10分钟。 4.  弃微量柱,用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。 5.  1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。 ...

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