1.  在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2.  准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸，故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中，加入10~20 ml LB培养基。 3.  将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中，并移至过滤装置，再将细菌悬液用吸管加到滤膜上，注意不要往滤膜边缘4...

热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl 2 低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。 1.  l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（10...

在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。 1.   取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LA培养...

如果将产生某种抗生素的菌划直线接种在豆芽汁葡萄糖琼脂培养基平板上，经培养后，就会长出一条菌带，并产生某种抗生素向菌带周围扩散。再与这条菌带相垂直划直线接种某些不同的试验菌，就会产生不同长度的抑菌带。根据抑菌带的长短，即可判断该抗生素对不同微生物的影响。本实验说明产黄青霉产生的青霉素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制效果。 1.  将豆芽汁葡萄糖琼脂培养基溶化后，冷至45℃左右倒平板，凝固待用。 2.  用接种环挑取产黄...

1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul LB培养基混匀，37 ℃培养30min 5、涂在含适当浓度抗生素的LB平板上。 6、37 ℃培养过...

1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2 ml LB培养基的试管中，37 ℃振荡培养过夜。 2、取0.1ml过夜培养物转种于含10 ml LB培养基的三角瓶中，37 ℃振荡培养3h至OD600=0.3。 3、然后把培养物倒入1.5 ml离心管中，冰浴10min。 4、在4 ℃下以4000 rpm离心5min，去上清液。 5、把菌体悬浮...

焦性没食子酸与碱性溶液作用后，形成碱性没食子酸盐，在此反应过程中能吸收氧气而造成厌氧环境；牛肉渣内既含有不饱和脂肪酸能吸收氧，又含有谷胱甘肽（glutathione）能形成负氧化还原电位差；厌氧罐是采用某种方法除去其中的氧，例如将镁与氧化锌制成产氢气袋，放入罐中加水反应产生氢，钯或铂是催化剂，在常温下催化氢与氧化合成水，则可除去密封的厌氧罐中的氧。 1.  焦性没食子酸法 （1）大管套小管法在大试管中放入少许棉花和焦性没食子酸，焦...

生长在液体培养基内，可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中，可以沿接种线向四周蔓延；或仅沿线生长；也可上层生长得好，甚至连成一片，底部很少生长；或底部长得好，上层甚至不生长。利用微生物的培养特征，可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。检验微生物的培养特征，或进行其他微生物学实验时，接种过程必须保证不被其他微生物所污染，为此，除工作环境要求尽可能地避免或减少杂菌污染外，熟练地掌握各种无菌操作接种技术是很重要的。 ...

为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。 1.  稀释涂布平...

1.  在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。 2.  往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮棒从硝酸纤维素膜上将菌落刮下来，形成菌悬液。 3.  将平板中的菌悬液收集到一个50 ml 塑料管中，加无菌的甘油至终浓度15%，充分混匀后分装到1 ml的小管中，每管500 μl，于-70℃冻存（...