DNA片段探针的应用实验-甲酰胺法
1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液,密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中,加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA,煮沸10 min。 3. 探针混合液移至冰浴,加入2 ml 杂交液Ⅰ 。 4. 用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上,重新密封后于42℃温育过夜。 ...
查看详情1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液,密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中,加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA,煮沸10 min。 3. 探针混合液移至冰浴,加入2 ml 杂交液Ⅰ 。 4. 用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上,重新密封后于42℃温育过夜。 ...
查看详情芽胞(Spore)是细菌的休眠状态,对各种理化因素有强大的抵抗力,能耐受恶劣环境的影响。芽胞折光性很强,可经特殊染色法染色后,在光学显微镜下观察。本实验要求学生了解两种特殊染色法并认识这种细菌特殊构造。 一、威-康(Wiltz-Conkln)二氏芽胞染色法 1. 材料 破伤风杆菌(Clostridium tetani)24 h琼脂斜面纯培养物, 3%孔雀绿水溶液, 0.5%花红水溶液, ...
查看详情细菌的荚膜(Capsule)具有保护细菌抵抗吞噬和消化的作用,可增加细菌的侵袭力。荚膜不易被普通染色法染色,需经特殊染色法染色后才能着色,易于观察。 一、材料 经腹腔接种肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)后死亡的小白鼠, 结晶紫染液,20%硫酸铜溶液, 解剖器材, 滤纸片。 二、方法 1. 涂片 解剖小白...
查看详情把受支原体污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔中,借动物免疫系统消灭支原体,而肿瘤细胞却能在体内继续生长,待—定时间后,从体内取出细胞再进行培养繁殖。但此法稍繁琐,按同一原理也可在体外进行。 ...
查看详情从动物腹腔采取巨噬细胞,为排除其它细胞成分。可先进行纯化。然后再加入被支 原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中,为检验支原体是否已被消除干净, 可利用支持物培养法验证;取出支持物逐日染色、镜检观察,至支原体已被 消除干净为止。 注意事项 巨噬细胞不纯化亦可,但难免混杂有少许间皮细胞,这些细胞因量少,一般难持久生存,最终与巨噬细胞均死亡,对培养细胞...
查看详情根据支原体对热耐受性差的特点,有人把受污染的细胞置41 ℃中作用5~10 小时, 最长可达18 小时,以杀灭支原体。 注意事项 但41 ℃对培养细胞本身也有很大影响,故在处理前, 应先进行预试验,确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的最佳处理时间;加温 处理很难避免不伤害细胞,是其不足。 ...
查看详情电转化法:外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定,形成电穿孔,不仅有利于离子和水进入细菌细胞,也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。 1. l ml X-gal (20 mg/ml),25 ml Amp(100 mg/ml),250 ml 制备选择性培养基平板:在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml),混匀后倒入灭菌培养皿中; ...
查看详情1. 在含抗生素的平板上,通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度,计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸,故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中,加入10~20 ml LB培养基。 3. 将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中,并移至过滤装置,再将细菌悬液用吸管加到滤膜上,注意不要往滤膜边缘4...
查看详情热激法:大肠杆菌在0 ℃ CaCl 2 低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42 ℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中,重组子基因得到表达,在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。 1. l ml X-gal (20 mg/ml),25 ml Amp(10...
查看详情在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中,细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开,而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下,大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀,而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心,可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质,质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。 1. 取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LA培养...
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