一、细菌生化反应常用培养基的制备 1.  蛋白胨水 成分：蛋白胨1.0 g、氯化钠0.5 g、蒸馏水100 ml。 将上述成分加热溶解后校正pH7.6，分装试管，15磅15 min高压灭菌备用。常用于制备糖发酵培养基或用于检查细菌的靛基质产生试验等。 2.  糖发酵管 成分：蛋白胨水，葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖或麦芽糖等糖，溴甲...

1.  用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2.  往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸10 min。 3.  探针混合液移至冰浴，加入2 ml 杂交液Ⅰ 。 4.  用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上，重新密封后于42℃温育过夜。 ...

芽胞(Spore)是细菌的休眠状态，对各种理化因素有强大的抵抗力，能耐受恶劣环境的影响。芽胞折光性很强，可经特殊染色法染色后，在光学显微镜下观察。本实验要求学生了解两种特殊染色法并认识这种细菌特殊构造。 一、威-康(Wiltz-Conkln)二氏芽胞染色法 1.  材料 破伤风杆菌（Clostridium tetani）24 h琼脂斜面纯培养物， 3%孔雀绿水溶液， 0.5%花红水溶液， ...

细菌的荚膜(Capsule)具有保护细菌抵抗吞噬和消化的作用，可增加细菌的侵袭力。荚膜不易被普通染色法染色，需经特殊染色法染色后才能着色，易于观察。 一、材料 经腹腔接种肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)后死亡的小白鼠， 结晶紫染液，20%硫酸铜溶液， 解剖器材， 滤纸片。 二、方法 1.  涂片 解剖小白...

把受支原体污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而肿瘤细胞却能在体内继续生长，待—定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。但此法稍繁琐，按同一原理也可在体外进行。 ...

从动物腹腔采取巨噬细胞，为排除其它细胞成分。可先进行纯化。然后再加入被支 原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中，为检验支原体是否已被消除干净， 可利用支持物培养法验证；取出支持物逐日染色、镜检观察，至支原体已被 消除干净为止。 注意事项 巨噬细胞不纯化亦可，但难免混杂有少许间皮细胞，这些细胞因量少，一般难持久生存，最终与巨噬细胞均死亡，对培养细胞...

根据支原体对热耐受性差的特点，有人把受污染的细胞置41 ℃中作用5~10 小时， 最长可达18 小时，以杀灭支原体。 注意事项 但41 ℃对培养细胞本身也有很大影响，故在处理前， 应先进行预试验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的最佳处理时间；加温 处理很难避免不伤害细胞，是其不足。 ...

电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。 1.  l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml 制备选择性培养基平板：在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中； ...

1.  在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2.  准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸，故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中，加入10~20 ml LB培养基。 3.  将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中，并移至过滤装置，再将细菌悬液用吸管加到滤膜上，注意不要往滤膜边缘4...

热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl 2 低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。 1.  l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（10...