1.  用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu + 转化体。 2.  影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之后，含插入互补cdc 101-1突变基因片段的质粒的菌落以及含随机非互补质粒的潜在CDC 101 ...

1.  将DNA溶于pH8.0的1×TE缓冲液，终浓度为10 mg/ml。于4℃搅拌过夜。 2.  用一个大的超声探头，在75%的满功率下超声处理DNA 30 s，以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳，检查超声剪切后片段大小的分布。如有必要，可重复超声处理，直到获得适当的片段大小分布。片段大小范围在2~15 kb 之间，平均大小约为7 kb 是合适的。 3.  用缓冲液平衡酚抽提...

1.  实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2.  转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过夜，直到细胞密度达1×10 8 细胞/ml（OD600≈1.3~1.5，依据菌株不同而异）。 3.  于4℃以4 000 g 离心收获培养...

1.  在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。 2.  转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养液中取适量的菌液，接种于盛有50 ml YPD培养基的250 ml 无菌烧瓶中，再过夜培养，使细胞密度达到1~2×10 7 细胞/ml（OD 600 =...

1.  在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2.  转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后接种适量的过夜培养液，再于30℃培养过夜，到细胞密度为1×10 7 细胞/ml （OD 600 ≈0.3~0.5，依据菌株而定）， 为了获得2~3倍高的转化效...

1.  制备双份的转印细菌菌落或噬斑的硝酸纤维素滤膜（处理和干烤过）。 2.  在室温下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。 3.  然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至过夜。 4.  在预杂交液中37℃预杂交1 h。 5.  在装有20 ml 以上的SSC杂交液的可封口的杂交袋中可移入多达20张的滤膜。 ...

1.  将过夜培养的酵母菌培养液接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养。离心5~10 s，用1 ml 无菌水重悬沉淀细胞，重复洗涤1次，再用1 ml 无菌水重悬。 2.  检查细胞密度，记录数据后将细胞密度调整到2×10 8 细胞/ml。用无菌水系列稀释细胞悬液，最终确定在平板上生长出100~200个菌落的稀释度。在平板上分别涂布0.1 ml 和0.2 ml 释的菌悬液。 ...

1.  将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×10 8 细胞/ml。 2.  转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10 s，细胞重悬于1 ml 无菌水中，重复洗涤。再用1.5 ml 无菌的0.1 mol/l pH7.0的磷酸钠缓冲液重悬细胞。 3.  在13 mm×100 m...

1.  制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成，可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50 ml 烧瓶中；如果孢子在液体培养基中形成，可将1 ml 培养液加入5 ml 水中。然后加入0.5 ml 酵母裂解酶-20T溶液和10 μl 2-巯基乙醇，于30℃摇床缓缓摇动下培养过夜。 2.  加入5 ml 1.5%NP-40溶液，将混合悬液移到一支一次性的15 ml 试管中，冰浴15 min。 3. ...

1.  加热玻璃管，并不停地转动，直到受热部分变软为止。移开火焰，迅速均匀用力拉玻璃管的两端，拉成一根很细的玻璃丝（直径约40~150 μm，而人的一根头发丝为40~100 μm）。 2.  按大约1.3 cm 长度将玻璃丝截成许多段，截玻璃丝时，简单的做法是从一端开始， 用手一段段地拉断，最好戴乳胶手套，这样把握玻璃丝时可以握得紧些。另外，也可用崭新的剃须刀片将玻璃截断成所需长度。 3.  在显微镜下观察玻璃...