1. 标本采集：用无菌棉签取新鲜、无尿液混入的病人粪便（脓血或黏液部分更好），立即送检。 2. 将标本直接接种于S-S琼脂平板上，作分区划线分离，置37℃恒温箱培养18～24小时。 3. 挑取无色透明或半透明菌落接种双糖铁培养基，置37℃恒温箱培养18～24小时。 4. 进一步根据情况作吲哚试验、肥达氏试验等生化反应。 5. 用多价诊断血清作血清学鉴定。 ...

1、革兰氏染色标本：大肠杆菌和伤寒杆菌革兰氏染色呈红色、G－杆菌，两端钝圆，中等大小。 2、琼脂平板培养物 （1）伊红美蓝培养基：为常用的肠道致病菌分离鉴别培养基。在该培养基上，大肠杆菌能发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝合成紫黑色化合物，故其菌落呈紫黑色，伤寒杆菌对乳糖不分解，故其菌落呈无色或微黄色透明菌落。 （2）S-S培养基：为常用的肠道致病菌选择培养基，内含柠檬酸钠、煌绿对大肠杆菌有抑制作用，胆盐...

1.  将已解剖的器官或胚胎置于写有标签的20 ml 螺口玻璃小瓶中（经硅烷化处理的玻璃瓶专用于小量样品的处理），如入4℃新鲜配制的4%PFA，置4℃固定至所需时间止。 2.  于60℃烘箱中熔化石蜡。 3.  固定完成后，倒去固定液（注意勿丢失样品），以50%乙醇替代。然后立即换新鲜的乙醇，在50%乙醇中脱水3次，室温放置每次20 min。继而以70%乙醇脱水3 次，室温每次20 min。（样品于70%乙醇中...

1.  将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD 600 ≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离心5 min。 2.  确定酵母细胞的湿重，它与压紧的细胞体积大致相同。在所有的后续步骤中菌体的量将当作1体积来考虑。 3.  细胞用2~4体积冰水重悬，并立即于4℃，1 500 g 离...

1. 空气中细菌的分布 （1）方法：采用沉降法，暴皿15分钟，常规培养24小时观察结果。 （2）结果观察：培养基表面菌落生长情况。 2. 皮肤表面细菌的分布 （1）方法：采用涂抹法，将手指于酒精消毒前后分别涂抹琼脂平板表面，常规培养24小时观察结果。 （2）结果观察：培养基表面菌落生长情况。 3. 水中细菌的分布 ...

1.  将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD 600 ≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离心5 min。 2.  确定酵母细胞的湿重，它与压紧的细胞体积大致相同。在所有的后续步骤中菌体的量将当作1体积来考虑。 3.  细胞用2~4体积冰水重悬，并立即于4℃，1 500 g 离...

1.  在直径82 mm LB平极上倒入含200 μl 宿主菌的3 ml 0.7%顶层琼脂糖，放置10 min。 2.  通过放射自显影胶片上的杂交斑点确定阳性噬斑在原平板上的位置，用牙签轻轻插入斑中。 3.  然后接种到步骤1制备的次级平板的顶层琼脂糖中，此牙签在平板上接连插30~40下。 4.  或用吸管插入阳性噬斑的位置，取一小块环形琼脂糖转入1 ml SM中。 ...

某些细菌分解培养基中胱氨酸等含硫氨基酸生成硫化氢，硫遇到培养基中的铅盐或铁盐（如硫酸亚铁）形成黑褐色的硫化铅（或硫化铁）沉淀物。 将乙型副伤寒杆菌和大肠杆菌分别穿刺接种于醋酸铅培养基中，置37℃恒温箱经18～24小时培养后，若出现黑色沉淀者为阳性。 ...

一、热酸酚方案（基本方案1） 1.  TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。 2.  操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。 3.  将得到大约10 mg RNA。 二、玻璃珠方案（备择方案1） 1.  将体积增加到15 ml RNA缓冲液10 ml 体枳玻璃珠，15 ml 酚/氯仿/异戊醇，及30 ml 无水乙醇...

1.  培养并收集酵母菌细胞，冷冻细胞沉淀。 2.  用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。 3.  加1体积冷的酸洗玻璃珠（体积与约200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25：24 ：1酚/氯仿/异戊醇，拧紧瓶盖，然后颠倒并上下振荡以保证珠子悬浮，在旋涡混合器上高速剧烈振荡2 min。 4.  室温下离心1 min，将200~250 μl 水（上）相转移到...