免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。 1.  在22×22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。 ...

以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×10 6 个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。 2. 取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。 3. 将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混...

1.  将两种寡核苷酸各1 μg加入微量离心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×测序酶缓冲液。70℃加热5 min，然后在合适的退火温度下保温5  min，取2 μl 留待以后的分析。 2.  加2 μl 4种dNTP混合液和10 U测序酶，30℃温育30 min。 3.  70℃ 10 min 灭活DNA聚合酶，取2 μl 留待以后的分析。 4.  加10×限制性内切酶反应缓冲液，加...

一、包被抗原 1. 用50mM 的碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原浓度为10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶标板，4℃放置过夜。 2. 第二天弃去包被液后，用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。 3. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。 4...

1.  离子交换凝胶的选择依据： （1）根据蛋白质的pH只稳定范围。蛋白质在等电点pI以上pH稳定时选择阴离子交换凝胶介质，在pI以下pH的稳定时，则选用阳离子交换凝胶介质。 （2）根据特分离蛋白质的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白，选用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose样凝胶；更大的分子，用Sephadex A-25或C-25。 ...

蛋白质在十二烷基硫酸钠（SDS）和巯基乙醇的作用下，分子中的二硫键还原，氢键等打开，形成按1.4 g SDS/1 g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物，该复合物带负电，故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移，且主要由于凝胶的分子筛作用，迁移速率与蛋白质的分子量大小有关，因此可以浓缩和分离蛋白质多肽。   聚丙烯酰凝胶电泳分离蛋白质多数采用一种不连续的缓冲系统，主要分为较低浓度的成层胶和较高浓度的分离胶，配制凝胶的缓冲液，其pH值和离子强度也相应不同，故电泳时，样品中的SDS-...

一、仪器设备 色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；浓缩用离心机 （低速5,000 rpm）；浓缩用离心管Centriprep-30 （Amicon 4322） 请注意其使用方法。 二、药品试剂 胶体Sephacryl S-300 ...

质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。 一、实验材料准备 1.  器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5 ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，...

Western 杂交时，为确认蛋白是否转至 PVDF 膜上，可用下列方 法对膜上蛋白进行可逆性染色。 1.  氨基黑染色 染液：0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropa nol (v/v) and 10% acetic acid. 染色：将 PVDF 膜置于染液中染色数钟，ddH2 O 脱色。 2. 考马氏亮蓝染色 染液：0.1%...

一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV 质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4. 用PmeI 单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。 5. 胶回收线性化质粒，以备共转化使用。 ...