1.  如基本方案步骤1所述，用SDS-聚丙烯醜胺凝胶电泳分离样品，使用含100 μmol/l 钒酸钠的转移液将蛋白质转印至硝酸纤维素滤膜上。 2.  在塑料容器内，膜与不含叠氮钠的封阻液在室温温育至少30 min。 3.  室温下膜与30~50 ml 抗磷酸酪氨酸抗体温育60~120 min，间或摇动。 4.  在一干净的塑料容器内，用TN缓冲液冼膜2次，每次10 min；用含0.0...

1.  用等体积的2×SDS上样缓冲液溶解培养细胞，组织或裂解物，煮沸5 min。 2.  在SDS聚丙烯酰胺凝胶上电泳样品，用含100 μmol/l 钒酸钠的转移缓冲液将蛋白质转移至适用于免疫印迹分析的膜上。 3.  膜在室温下用30~50 ml 封阻液封闭30 min 以上。 4.  在带盖的塑料容器内，膜与30~50 ml 抗磷酸酪氨酸抗体溶液室温温育60~120 min，间或摇动。...

1.  用SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离放射性标记的瞵酸化蛋白质，电转移至PVDF膜上。 2.  用水充分洗膜，用1 000 ml 水洗3次，每次2 min。 3.  塑料容器内，用足够的1 mol/l KOH浸过膜，在55℃烤箱或水浴锅內温育120 min。 4.  倒尽KOH，膜用500 ml TN缓冲液浸泡5 min 以中和残余的KOH，用500 ml 1 mol/l Tris·C...

1.  分别接种3×10 6 Sf9细胞于15个盛有5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液60 mm血组织培养皿中。27℃溫育2 h，使细胞贴壁，然后每次均以感染复数（MOI）为10的量，用野生型病毒感染7个培养皿，用重组病毒感染7个培养皿，剩余的一个培养皿为非感染对照。 2.  在感染后的不同时间（从感染后约15~72 h）收获细胞，感染后15 h 收获非感染细胞。将细胞和培养...

1.  接种2.5×10 6 细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育2 h。使细胞贴壁。吸出培养液，然后加入1 ml 含重组病毒或1 ml 含野生型病毒的无血清完全培养液，感染复数（MOI）为5~10。 2.  将每个平皿中的培养液移去后，再往其中加入3 ml ...

利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。 1.  离子交换剂的处理 称取1.5 克DEAE 纤维素( DE-23 ) 干粉, 加入0 . 5 mol/ LNaOH 溶液( 约50ml) , 轻轻搅拌, 浸泡至少0.5 小时( 不超过1 小时) , 用玻璃砂漏斗抽滤, 并用去离子水洗至近中性, 抽干后, 放入小烧杯中, 加50 ml 0.5 mol/ L HCl , 搅匀, 浸泡0.5 小...

蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrolase ) ( EC. 3 . 2 . 1 . 26 ) 特异地催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解, 具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 也能催化棉子糖水解, 生成密二糖和果糖。   啤酒酵母中含有大量的蔗糖酶, 通过研磨破细胞壁, 使酶游离出来, 用水萃取酶, 然后用有机溶剂沉淀酶蛋白得到粗制品,还可用柱层析进...

本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过测定各单核苷酸的含量, 可以计算出酵母RNA 的碱基组成。 1.  RNA 的碱水解 称取20 mg 酵母RNA, 置于刻度离心试管中, 加2ml 新配 制的0 . 3 mol/ L KOH, 用细玻璃棒搅拌溶解, 于37 ℃ 水浴中保 ...

一、仪器用具 恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速绝对不能超过最高速限；液态氮及冰筒；37℃温水浴。 二、药品试剂 转型菌株pQG11/M15 [pREP] 单一菌落；LB/amp/kan 及IPTG （1 M stock...

免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。 1.  在22×22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。 ...