葡萄球菌A蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。 1.  用0.1 M PH8.0 磷酸缓冲液浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶，15 min。按1 g干胶200 ml上述缓冲液充分洗涤凝胶（用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤） ...

DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH 将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白（等电点为 PH6.85～7.5），其余均属酸性蛋白。在PH7.2～7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出，而其 他蛋白则被...

蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 1.  取正常人混合血清加等量生理盐水，于搅拌下逐滴加入与 稀释血清等量的饱和硫酸铵[终...

1.  如基本方案步骤1所述，用SDS-聚丙烯醜胺凝胶电泳分离样品，使用含100 μmol/l 钒酸钠的转移液将蛋白质转印至硝酸纤维素滤膜上。 2.  在塑料容器内，膜与不含叠氮钠的封阻液在室温温育至少30 min。 3.  室温下膜与30~50 ml 抗磷酸酪氨酸抗体温育60~120 min，间或摇动。 4.  在一干净的塑料容器内，用TN缓冲液冼膜2次，每次10 min；用含0.0...

1.  用等体积的2×SDS上样缓冲液溶解培养细胞，组织或裂解物，煮沸5 min。 2.  在SDS聚丙烯酰胺凝胶上电泳样品，用含100 μmol/l 钒酸钠的转移缓冲液将蛋白质转移至适用于免疫印迹分析的膜上。 3.  膜在室温下用30~50 ml 封阻液封闭30 min 以上。 4.  在带盖的塑料容器内，膜与30~50 ml 抗磷酸酪氨酸抗体溶液室温温育60~120 min，间或摇动。...

1.  用SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离放射性标记的瞵酸化蛋白质，电转移至PVDF膜上。 2.  用水充分洗膜，用1 000 ml 水洗3次，每次2 min。 3.  塑料容器内，用足够的1 mol/l KOH浸过膜，在55℃烤箱或水浴锅內温育120 min。 4.  倒尽KOH，膜用500 ml TN缓冲液浸泡5 min 以中和残余的KOH，用500 ml 1 mol/l Tris·C...

1.  分别接种3×10 6 Sf9细胞于15个盛有5 ml 含10%胎牛血清的完全培养液60 mm血组织培养皿中。27℃溫育2 h，使细胞贴壁，然后每次均以感染复数（MOI）为10的量，用野生型病毒感染7个培养皿，用重组病毒感染7个培养皿，剩余的一个培养皿为非感染对照。 2.  在感染后的不同时间（从感染后约15~72 h）收获细胞，感染后15 h 收获非感染细胞。将细胞和培养...

1.  接种2.5×10 6 细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育2 h。使细胞贴壁。吸出培养液，然后加入1 ml 含重组病毒或1 ml 含野生型病毒的无血清完全培养液，感染复数（MOI）为5~10。 2.  将每个平皿中的培养液移去后，再往其中加入3 ml ...

利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。 1.  离子交换剂的处理 称取1.5 克DEAE 纤维素( DE-23 ) 干粉, 加入0 . 5 mol/ LNaOH 溶液( 约50ml) , 轻轻搅拌, 浸泡至少0.5 小时( 不超过1 小时) , 用玻璃砂漏斗抽滤, 并用去离子水洗至近中性, 抽干后, 放入小烧杯中, 加50 ml 0.5 mol/ L HCl , 搅匀, 浸泡0.5 小...

蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrolase ) ( EC. 3 . 2 . 1 . 26 ) 特异地催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解, 具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 也能催化棉子糖水解, 生成密二糖和果糖。   啤酒酵母中含有大量的蔗糖酶, 通过研磨破细胞壁, 使酶游离出来, 用水萃取酶, 然后用有机溶剂沉淀酶蛋白得到粗制品,还可用柱层析进...