1.  用经脱气的HPLC级水洗去反相柱的有机溶剂，梯度从100%有机溶剂到100%水，流速1 ml/min，持续15 min 以上。 2.  以100%的TFA/乙腈缓冲液平衡柱子至柱压和光吸收值达到恒定。用10~15 min 的线性梯度使之逐渐转到0.1%TFA水溶液，并以0.1%TFA平衡15 min。 3.  进行空白样品的层析检查柱子：流速1 ml/min，0~100%TFA/乙腈缓冲液线性梯度，时间4...

1.  制备表达带组氨酸尾的融合蛋白的大肠杆菌菌体沉淀。 2.  准备NTA介质层析柱，但柱子最后以GuMCAC-0缓冲液洗涤. 3.  在冰浴中冻融菌体沉淀。加5 ml GuMCAC-0缓冲液，用吸管抽吸重悬，超声破菌或匀浆。在-70℃冻结10 min，室温冻融。 4.   用振摇器、旋转混合器或磁力搅拌器轻柔地混匀样品60 min，在4 ℃ 27 000 g 离心30 mi...

1.  接种含以pET载体表达带组氨酸尾融合蛋白的大肠扦菌BL21（DE3）pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨苄青霉素/氯霉素培养基。于37℃摇荡培养过夜。 2.  转接1 ml 过夜培养物于100 ml M9ZB/氨苄青霉索/氯霉素培养基，于37℃揺荡培 养至OD 600 =0.7~1.0。 3.  加入1 ml 0.1 mol/l IPTG，干37...

1.  如果凝胶过滤的介质是干粉，则需在凝胶过滤缓冲液中完全溶胀。 2.  在远离过往通道及直接光照的恒温环境，将层折柱垂直安装在稳固的实验室支架上。 3.  用一注射器将凝胶过滤缓冲液从柱子的输出管注入柱子，至缓冲液达到柱子支持体平面之上，注射器留在输出端以堵住柱子。 4.  沿着一根顺柱子内壁而放的玻璃棒将凝胶混悬物倒入柱子至所设高度，再小心往凝胶顶部加入1 cm 高的一层缓冲...

1.  将转印膜置于塑料容器中，在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次，每次30 min，然后再于室温用Tween 20溶液洗2次，每次30 min。 2.  用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3.  在Tween 20溶液中洗膜2次，脱色至在灰色的背景下显现出黑色的蛋白条带，晾干。 ...

当消化多个样品时，以下方案可减少取吸次数，节省时间和减少污染的机会。 1.  分别加入相同体积的各个样品DNA至不同微量离心管中。 为避免交叉污染，各样品用不同的吸头。 2.  制备好“预混合液”，它含有足够量的消化所有样品的10×反应缓冲液和水，置于冰浴。 3.  加入足以消化所有样品的酶于“预混合液”的管中，轻弹管壁，混匀，置于冰浴。 4.  取适量上述混合液加入...

1. 将凝胶置于塑料容器中，加入50 ml 甲醛固定液，在旋转摇床中缓慢摇动10 min。 2.  倾去固定液，用水冼两次，每次5 min，缓慢摇动。 3.  倾去水，凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 min，缓慢摇动。 4.  倾去硫代硫酸钠溶液，用水洗凝胶两次，毎次20 s。 5.  倾去水，将凝胶浸泡在50 ml 硝酸银中10 min。缓慢摇动。 ...

1.  将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中，加入100 ml 固定液，在旋转摇床中缓慢摇动30 min。 2.  倾去固定液，将凝胶浸没在脱色液中，缓慢摇动30 min。 3.  倾去脱色液，加50 ml 10%戊二醛，在通风橱中缓慢摇动10 min。 4.  倾去戊二醛，用水彻底洗凝胶2 h，期间换水几次以保证获得低本底水平。 5.  倾去水，以100 ml μg/m...

1.  将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2.  倾去固定液，加5倍凝胶体积的脱色液，缓慢摇动60 min 以上。 3.  倾去脱色液，加5倍凝胶体积的10%戊二醛，在通风橱中缓慢摇动30 min。 4.  倾去戊二醛溶液，用水洗凝胶4次以上，每次30 min 以上，最后一次洗涤以过夜为佳。缓慢摇动。 5.  ...

1.  将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢揺动2 h。 2.  倾去固定液，以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动4 h。 3.  倾去染色液，用约50 ml 固定液冲洗凝胶。 4.  倾去固定液，以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2 h，倾去脱色液，再加入新脱色液同时至获得蓝色条带及干净的背景。凝胶可放置在乙酸或水中保存。 5....