1.  在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉淀至1 μg/μl。 2.  室温配罝如下反应混合液（总体积20 μl）： （1）4.0 μl 5×转录缓冲液 （2）0.2 μl 1 mol/l DTT （3）60 U RNA酶抑制剂 ...

1.  为了转化文库，将约20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培养液接种到Glc/CM-Ura-His 省却成分液体培养基中，于30℃培养过夜。 2.  将过夜培养液稀释到300 ml Glc/CM-Ura-His 省却成分液体培养基中，浓度约为2×10 6 细胞/ml（OD 600 ≈0.10），于30℃培...

血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、用样量少和分辨率高等优点，并可通过控制单体浓度或单体与交联剂的比例聚合成孔径大小不同的凝胶，用于蛋白质、核酸等物质的分离、定性和定量分析。 根据凝胶形状不同分为盘状电泳和板状电泳。盘状电泳是在直立的玻璃管中，利用不连续的缓冲液pH值进行电泳而命名，同时，样品混合物分开形成的带很窄，呈圆盘状，因此圆盘电泳这个名字成了不连续性和盘状的双关语。不连续盘状电泳具有很高分辨力，这是由于有三种效应存在、浓...

血清脂蛋白经苏丹黑B染色后，以琼脂糖为载体，在pH8.6巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带。按电泳移动的速度不同，正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为β-脂蛋白（最深）、前β-脂蛋白（最浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些）。在原点处应无乳糜微粒，也见不到中间脂蛋白的条带，有时前β-脂蛋白也显示不出来。 前β-脂蛋白比α-脂蛋白深染，且血清甘油三酯明显升高，胆固醇正常或略高，可以确定为Ⅳ型高血脂症。 β-脂蛋白区带比正常明显深染，血清总胆固醇明显增高而...

rRNA 占细胞RNA总量的80~85%,以ethidium bromide 染色后，呈现于胶体上的两个主要RNA色带应该分别是large与small rRNAs （真核生物为28S 与18S,原核生物为23S 与16S）；散布于small rRNA 附近，呈淡淡smear的就是mRNAs，这是因为mRNAs 存在量不多，而且长度不一的缘故。长度较短的5S rRNA 及tRNA 等则在胶体下方也以特定色带呈现。 一、实验材料准备 ...

一、作业 1.  提交使用上述软件对人脂联素蛋白质序列进行基本性质分析、同源性分析、motif结构分析以及二级结构和三维结构预测的结果。 2.  相互对比结果，说明产生不同结果的原因，总结进行上述分析所需注意的关键事项。 1.  人脂联素蛋白质序列的检索 （1）调用Internet浏览器并在其地址栏输入Entrez网址（ ）； ...

1.  接种—个单菌落于50 ml LB培养液中，于37℃摇床培养过夜（250 r/min）。 2.  往一个2 L 的烧瓶中加入400 ml LB培养液，再加入4  ml 过夜培养液，于37℃；摇床，培养至OD 590 为0.375。 3.  将培养液分装到8个50 ml 预冷无菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10 min，然后于4℃，1 600 g 离心7 ...

1.  电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2.  将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 min。 3.  将膜移入1%乙酸1 min，如有需要，换液至条带显迹清晰。 4.  穿带无粉尘手套用刀片将目标蛋白条带切下，小心切去多余的硝酸纤维素膜后，放入微量离心管中，取一片空白膜作对照。 ...

1.  制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2.  组装垂直凝胶电泳装置。 3.  将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。 4.  剩余的1×凝胶缓冲液加入还原型谷胱甘肽（干粉）至终浓度1 mmol/l，将它们倒入上层缓冲液贮槽。将凝胶连接于恒压/恒流电源。 5.  10 mA 下预电泳45 m...

1.  准备和用［ 35 S］甲硫氨酸标记细胞，用0.2~1 mCi/ml 的［ 35 S］甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2.  脉冲标记后，除去［ 35 S］甲硫氨酸培养基，用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次，加入10 ml 追加培养基继续培养。 3.  在37℃温...