1.  准备和用［ 35 S］甲硫氨酸标记细胞，用0.2~1 mCi/ml 的［ 35 S］甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2.  脉冲标记后，除去［ 35 S］甲硫氨酸培养基，用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次，加入10 ml 追加培养基继续培养。 3.  在37℃温...

1.  在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×10 7 ）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。 2.  加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO 2 的加湿培养箱于37℃温育15 min，以耗尽细胞内的甲硫氨酸。 3. ...

1.  培养悬浮细胞至对数增长期，室温300 g 离心5 min。回收10 7 ~10 8 细胞。 2.  每2×10 7 细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤，于室温300 g 离心5 min 回收细胞，小心重悬细胞并重复洗涤过程。 3.  ...

RAPD作为单引物的PCR扩增产物，其产生机理是引物首先结合到模板链，沿模板5’端方向延伸而产生不同长度的DNA片段，然后以这些片段为模板继续大量扩增。由于RAPD反应中，在3’端没有相应引物和模板互补，这样必然存在一个由引物沿模板DNA 5’端方向延伸后再在3’端形成同一引物互补序列的过程。 有人提出，在RAPD反应过程中，扩增可能存在一些这样的分子模式： （1）5’端带有引物的单链DNA分子在3’端发生折转、自身结合和延伸，并在3’端形成同一引物的互补序列，变性展开后即可成...

1.  按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改： （2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。 （4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细胞系来源的加30 μl，未克隆化来源的加100 μl）。然后按①，或②、或③进行操作： ①加入1：1抗Ig抗体-Sepharose偶联物...

1.  按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改： （2a）按每毫升加入2 μl 正常血清的量对放射性标记抗原进行预澄清处理，加入适量的抗血清，于4℃放置12~18 h， 111 000 g 离心10 min，保留上清。 （4a）加入1 μl 抗原特异性抗血清，3 μg 抗原持异性纯化单抗，或抗原特异性杂交瘤培养上清（克隆细胞系来源的加30 μl 或未克隆细胞系来源的加100 μl），用漩涡混合器混匀，于4℃放置2...

1.  1 ~30 mg/ml 的抗体在 4℃对 0.1 mol/l NaHCO 3 / 0.5 mol/l NaCl透析 24 h，期间换液3次。透析液的体积应500倍于抗体溶液。 2.  于4℃10 000 g 离心1 h，除去聚集体。 3.  取小份上清测A 280 确定抗体的浓度。用0.1 mol/l ...

1.  用已脱气HPLC级水洗去SE柱的贮存溶剂，流速1 ml/min。在室温以已脱气的SE缓冲液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基线稳定。 2.  注射100 μl  缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 c...

1.  用10倍柱床的已脱气的水冼去柱子的贮存溶剂，并以10倍体积的高盐缓冲液在低pH洗硅胶类或聚合体IEX柱。 2.  如按前述阴离子方案分离，那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准，采用以下液体进行梯度洗脱：20 min 以上的0%~80%磷酸钠/NaCl缓冲液线性梯度或用复含梯度：0 min 时10%磷酸钠/NaCl，15 min 时60%，20 min 时80%，并保持5 min，然后在10 min 以上的时间回复到...

有时需要得到仅在DNA片段的内部存在的部分限制性位点切割产生DNA，这在用待克隆片段内部存在的限制酶切位点进行克隆和构建酶切图谱时特别有用。 1.  配制100 μl 含DNA和1×限制酶缓冲液的反应混合物。 2.  将反应混合物加入反应管中，其中管1加30 μl；管2~管4各加20 μl；管5加10 μl， 置于冰浴。 3.  加入所选用的酶至管1（3~10 U/μg DNA），轻弹管壁混匀，置于冰...