蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。蛋白质双向电泳是将蛋白质等电点和分子量两种特性结合起来进行蛋白质分离的技术, 因而具有较高的分辨率和灵敏度, 已成为蛋白质特别是复杂体系中的蛋白质检测和分析的一种强有力的生化...

1.  分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 μl，同时以两管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白对照。 2.  每管各加入1 ml 考马斯亮蓝染料溶液，振荡混匀，室温放置2 min。 3.  用1 cm 光径的微量比色杯测A 595 ，取A ...

乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型( M型) 两种。根据酶蛋白四聚体中H 型和M 型亚基比例的差别,可将LDH 同工酶分为五种, 即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5。亚基分子量相似, 为35000左右,...

MT是一种低分子量的蛋白质，含有大量的半胱氨酸，并对金属有较高的亲和性。 一、实验步骤 1.  组织按1:4（w/v）加入0.25 mol/l 蔗糖溶液，制备匀浆，18 000 g离心20 min（4℃）。 2.  取上清液0.5 ml，加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl缓冲液（pH8.0）。 3.  再加入1 ml CdCl2（10ppm）混匀，室温孵...

抗生物素蛋白具有与4个生物素亲和力极高的结合点，ABC法是利用抗生物素蛋白分别连接生物素标记二抗和生物素标记的酶。 一、材料准备 1.  DAB-H2O2配制：以0.05 mol/l Tris-HCl（pH7.6）溶解3,3-二氨基联苯胺50 mg，使DAN终浓度为0.05%，过滤。显色时加入30%H2O2适量，使其终浓度为0.01%。 二、实验步骤 1.  石蜡切片...

先将康体包被于反应板上，加入待测抗原，然后再加入酶标康体，显色后即可测得抗原含量。 一、材料准备 1.  包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸盐缓冲液：Na 2 CO 3 0.159 g，NaHCO 3 0.294 g，用蒸馏水溶解后，定容至100 ml。 ...

1.  用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DNA。 2.  在三个微量离心管内各加入40 μg 1 mg/ml 的单链DNA，如果靶序列的两条链都要被利用，则需用6个反应。 3.  亚硝酸反应：在一个管内加入10 μl pH4.3的2.5 mol/l 乙酸钠和50 μl 2 mol/l...

1.  在一个高压过的微量离心管中建立20 μl 的反应复合物如下： （1）4 μl  5×转录缓冲液 （2）1 μl  200 mmol/的3NTP混合液 （3）10 μl  ［α- 32 P］CTP （4）1 μl  胎盘核酸酶抑制剂 （5）1 μl  1 mg/ml ...

1.  将编码目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS质粒上的trxA基因3‘末端，构建符合读框的融合基因，或者于pALtrxA-781的单一Rsr 2位点上插入短肽编码序列。 2.  用含有重组硫氧还蛋白融合蛋白的质粒的连接混合液，转化感受态GI724细胞。转化的细胞种入含100 μg/ml 氨苄青霉素的IMC培养皿选择转化子，把培养皿放在30℃对流培养箱中温育，直到出现菌落。 ...

1.  按正确读框将DNA片段亚克隆入合适的pGEX载体中，转化大肠杆菌感受态细胞， 在LB/氨苄青霉素平皿上筛选转化子，以不插入外源DNA的自连载体作对照，平皿置37℃孵育12~15 h。 2.  挑取转化菌落接种于2 ml LB/氨苄青霉素培养基，并在氨苄青霉素主平板上划线培养。同时接种含母本pGEX载体的转化菌作对照。将主平板于37℃下温育12~15 h。液体培养物则于37℃摇床中振荡培养，直至混浊。 3...