核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 , 故测定未知浓度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便、迅速。若样品内混有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质, 则测定误差较大, 故应该先除去。 ...

根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出, 达到分离提纯的目的。   在0 . 14 mol/ L 的氯化钠溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA 核蛋白( DNP) 溶解度较小; 相反, 在1 mol/ L的氯化钠溶液中, DNP 溶解度最大, 而RNP 溶解度却很小, 从而使DNA、RNA 核蛋白分开。核蛋白分离后可...

蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被吸附物质间形成氢键, 这种氢键的强弱决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物在聚酰胺表面发生吸附、解吸附、...

蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。蛋白质双向电泳是将蛋白质等电点和分子量两种特性结合起来进行蛋白质分离的技术, 因而具有较高的分辨率和灵敏度, 已成为蛋白质特别是复杂体系中的蛋白质检测和分析的一种强有力的生化...

1.  分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 μl，同时以两管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白对照。 2.  每管各加入1 ml 考马斯亮蓝染料溶液，振荡混匀，室温放置2 min。 3.  用1 cm 光径的微量比色杯测A 595 ，取A ...

乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型( M型) 两种。根据酶蛋白四聚体中H 型和M 型亚基比例的差别,可将LDH 同工酶分为五种, 即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5。亚基分子量相似, 为35000左右,...

MT是一种低分子量的蛋白质，含有大量的半胱氨酸，并对金属有较高的亲和性。 一、实验步骤 1.  组织按1:4（w/v）加入0.25 mol/l 蔗糖溶液，制备匀浆，18 000 g离心20 min（4℃）。 2.  取上清液0.5 ml，加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl缓冲液（pH8.0）。 3.  再加入1 ml CdCl2（10ppm）混匀，室温孵...

抗生物素蛋白具有与4个生物素亲和力极高的结合点，ABC法是利用抗生物素蛋白分别连接生物素标记二抗和生物素标记的酶。 一、材料准备 1.  DAB-H2O2配制：以0.05 mol/l Tris-HCl（pH7.6）溶解3,3-二氨基联苯胺50 mg，使DAN终浓度为0.05%，过滤。显色时加入30%H2O2适量，使其终浓度为0.01%。 二、实验步骤 1.  石蜡切片...

先将康体包被于反应板上，加入待测抗原，然后再加入酶标康体，显色后即可测得抗原含量。 一、材料准备 1.  包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸盐缓冲液：Na 2 CO 3 0.159 g，NaHCO 3 0.294 g，用蒸馏水溶解后，定容至100 ml。 ...

1.  用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DNA。 2.  在三个微量离心管内各加入40 μg 1 mg/ml 的单链DNA，如果靶序列的两条链都要被利用，则需用6个反应。 3.  亚硝酸反应：在一个管内加入10 μl pH4.3的2.5 mol/l 乙酸钠和50 μl 2 mol/l...