如培养物为血液、羊水、腹水和胸水等细胞悬液时，可采用离心法分离。一般用低 速500~1000 转/分速度，离心5~10 分钟即可。如悬液量大，离心时间可适当延长，但 如离心速度过大和时间太长，易压挤细胞使之受损或死亡。微量全血法淋巴细胞培养时， 可不必进行淋巴细胞分离，可采用全血培养法。在需用大量白细胞进行培养情况下，才 应采用特殊分离技术如使用分层液等方法。 国产...

胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织，如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾 等软组织，对传代细胞也非常好。 用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca 2+ 和 Mg 2+ 对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用，故需用不含这些离子的BSS 配制。 血清有抑 制...

一、切割分离法 在进行组织块培养时，可采用剪切法，一般多剪切成1 mm 3 大 小的块。 具体操作如下： 1.  无菌切取1 cm 3 组织一块，置入青霉素瓶或小烧杯中，左手斜 持容器，右手持眼科尖剪或弯剪（剪柄较长为好）伸入容器中，反复剪...

一、NaHCO 3 液 1.  常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种，配制时，用三蒸馏水溶解后，过滤除菌， 分装小瓶，盖紧瓶塞，4 ℃冰箱或室温下保存。 2.  或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可； 可能有部分NaHCO 3 ...

胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处 保存。主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰蛋白酶的活力是用解离 酪蛋白的能力表示的。 1.  将D-Hanks液或Dulbecco盐溶液高压消毒灭菌，用NaHCO3液调节pH 至7.2 左右； 2.  称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许消毒的盐溶液调成糊装，然后再补...

一、自制无血清培养基举例 1.  小鼠胚胎癌细胞系培养基 DMEM/F12，1：1 混合成1000 ml； NaHCO 3， 2.4 g； HEPES（1.5 M），10.0 μl； 硒酸（5× －6 M），10.0 μ...

干粉型培养基是用球磨机或喷雾法将各种培养液成 分混合后制成，具有性质稳定、便于贮存和运输、使用方法简便等优点。具有维持细胞 生存和代谢需要的效果，与传统方式制备的合成培养基一样好。 干粉培养基因颗粒极细， 很容易完全溶解于水，配制培养液方法极易掌握，只要按照说明书将规定重量的干粉溶 解在一定量的水中即可；或按比例配制，经过消毒灭菌后即使用。 ...

胶原是细胞生长良好的基质，它是从动物特定组织中用人工法提取出的，利于组织 和细胞的固定，亦属天然培养基。胶原主要用于细胞的附着，能改善细胞表面性质，促 细胞生长。胶原可来自大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛真皮、牛眼水晶体等，其中以鼠尾胶原 最为常用和制备简便，可配制成0.1%—1%的醋酸溶液， 1.  取组织 取体重250 g 左右大白鼠一只，从尾根部切断鼠尾，置...

水解乳蛋白系乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，是常用的天然培养基。含有丰 富的氨基酸；开始是为猴肾细胞培养设计的，但以后也用于培养基它很多细胞系，包括 初代培养细胞等，效果很好。近年由于广泛使用合成培养基，已代替了乳白蛋白。但其 成分简单，在培养基不足等特殊情况下尚有其应用价值。 1.  称量：称0.5 g 水解乳蛋白粉入烧杯中，加少许灭菌Hanks 液调成糊状； ...

鸡血浆为最早用于培养的液体，含有纤维蛋白原和一定的营养成分，当与鸡胚胎汁混合后，能发生凝固，构成细胞生长的环境，利于细胞向三维空间生长，缺点是易于液化。因制备血浆后不再做无菌处理，全过程必须在严密无菌条件下进行。 利用生长一年 左右体大、健壮的雄鸡，采血压计前一天禁食，多喂水。 制备方法如下： 1.  肝素溶液制备 配制浓度20...