组织的分离实验-EDTA 消化分离法
EDTA是一种非酶性消化物,常用不含Ca 2+ 和Mg 2+ 的BSS 配成 0.02%的工作液。 关于EDTA的作用机制一般认为是:一些组织,尤其是上皮组织,在 生存中需要Ca 2+ 和Mg 2+ 才能维持组织的完...
查看详情EDTA是一种非酶性消化物,常用不含Ca 2+ 和Mg 2+ 的BSS 配成 0.02%的工作液。 关于EDTA的作用机制一般认为是:一些组织,尤其是上皮组织,在 生存中需要Ca 2+ 和Mg 2+ 才能维持组织的完...
查看详情如培养物为血液、羊水、腹水和胸水等细胞悬液时,可采用离心法分离。一般用低 速500~1000 转/分速度,离心5~10 分钟即可。如悬液量大,离心时间可适当延长,但 如离心速度过大和时间太长,易压挤细胞使之受损或死亡。微量全血法淋巴细胞培养时, 可不必进行淋巴细胞分离,可采用全血培养法。在需用大量白细胞进行培养情况下,才 应采用特殊分离技术如使用分层液等方法。 国产...
查看详情胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织,如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾 等软组织,对传代细胞也非常好。 用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca 2+ 和 Mg 2+ 对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用,故需用不含这些离子的BSS 配制。 血清有抑 制...
查看详情一、切割分离法 在进行组织块培养时,可采用剪切法,一般多剪切成1 mm 3 大 小的块。 具体操作如下: 1. 无菌切取1 cm 3 组织一块,置入青霉素瓶或小烧杯中,左手斜 持容器,右手持眼科尖剪或弯剪(剪柄较长为好)伸入容器中,反复剪...
查看详情一、NaHCO 3 液 1. 常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种,配制时,用三蒸馏水溶解后,过滤除菌, 分装小瓶,盖紧瓶塞,4 ℃冰箱或室温下保存。 2. 或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可; 可能有部分NaHCO 3 ...
查看详情胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏,是一种黄白色粉末,易潮解,应放置冷暗干燥处 保存。主要作用是使细胞间的蛋白质水解,使细胞相互离散。胰蛋白酶的活力是用解离 酪蛋白的能力表示的。 1. 将D-Hanks液或Dulbecco盐溶液高压消毒灭菌,用NaHCO3液调节pH 至7.2 左右; 2. 称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许消毒的盐溶液调成糊装,然后再补...
查看详情一、自制无血清培养基举例 1. 小鼠胚胎癌细胞系培养基 DMEM/F12,1:1 混合成1000 ml; NaHCO 3, 2.4 g; HEPES(1.5 M),10.0 μl; 硒酸(5× -6 M),10.0 μ...
查看详情干粉型培养基是用球磨机或喷雾法将各种培养液成 分混合后制成,具有性质稳定、便于贮存和运输、使用方法简便等优点。具有维持细胞 生存和代谢需要的效果,与传统方式制备的合成培养基一样好。 干粉培养基因颗粒极细, 很容易完全溶解于水,配制培养液方法极易掌握,只要按照说明书将规定重量的干粉溶 解在一定量的水中即可;或按比例配制,经过消毒灭菌后即使用。 ...
查看详情胶原是细胞生长良好的基质,它是从动物特定组织中用人工法提取出的,利于组织 和细胞的固定,亦属天然培养基。胶原主要用于细胞的附着,能改善细胞表面性质,促 细胞生长。胶原可来自大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛真皮、牛眼水晶体等,其中以鼠尾胶原 最为常用和制备简便,可配制成0.1%—1%的醋酸溶液, 1. 取组织 取体重250 g 左右大白鼠一只,从尾根部切断鼠尾,置...
查看详情水解乳蛋白系乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物,是常用的天然培养基。含有丰 富的氨基酸;开始是为猴肾细胞培养设计的,但以后也用于培养基它很多细胞系,包括 初代培养细胞等,效果很好。近年由于广泛使用合成培养基,已代替了乳白蛋白。但其 成分简单,在培养基不足等特殊情况下尚有其应用价值。 1. 称量:称0.5 g 水解乳蛋白粉入烧杯中,加少许灭菌Hanks 液调成糊状; ...
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