细胞凋亡检测实验-荧光探针双标记法
本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。 三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。 ...
查看详情本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。 三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。 ...
查看详情1. 前处理 称取10 g样品,准确加入内标溶液(13C-己烯雌酚、13C-睾酮、13C-雌二醇)(20 ng/mL)0.5 mL,加入10 mL pH5.2的乙酸钠-乙酸缓冲溶液,匀浆后,再加入β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液10 uL,于(37±1)℃振荡酶解过夜。取出冷却后,加入36 mL甲醇振荡提取30 min,转入离心管2000 g离心10 min。上清液中加入40 mL正己烷提取两次,弃去正己烷层。水...
查看详情1. 提取 取2.000 g样品于50 mL聚四氟乙烯离心管中,依次加入100 uL混合内标工作液(10 ng/mL),5~20 mL 0.2 mol/L的HCl溶液(以样品完全浸润为准)和50 uL 100 mmol/L的2-NBA溶液,振荡30 min后,反应混合物于37 ℃恒温箱中放置过夜(16 h)。 2. 净化 取出样品,冷却至室温。加入0.5...
查看详情本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 1. 说明书,耗材:DNA 制备管,小量滤器,2 ml 离心管,1.5 ml 离心管。 2. RNas...
查看详情1. 分析步骤 称取10.O g样品加6 mL缓冲溶液均质2 min,再加入8 mL缓冲溶液,37 ℃过夜。在4 ℃ 4000 r/min离心15 min,取出上清液,样品中再加入8 mL缓冲溶液,同上操作。合并上清液。 上清液用2 × 10 mL正己烷脱脂两次,弃去正己烷,剩余溶液调pH值到6.0,然后过Extrulet NT20柱,平衡20 min后,加入20 mL乙酸乙酯-叔丁...
查看详情1. 提取 称取5 g(准确至0.01 g)样品于50 mL离心管中,加入20 mL乙酸乙酯,均质1 min后,超声提取5 min,再以3000 r/min的速度离心10 min,取上清液转移至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并上清液于同一鸡心瓶中。 2. 净化 将提取液于40 ℃下旋转蒸发至近干(不能全部蒸干),用5 mL乙酸-乙酸乙酯...
查看详情1. 前处理 称取约2 g解冻试样,切成薄片并放入50 mL离心管中,加入20 mL 1%乙酸-乙腈溶液,均质1 min后放入超声波池中超声3 min, 4500 r/min离 心5 min,将上清液小心移入100 mL塑料离心管中,离心残渣用20 mL 1%乙酸-乙腈溶液再提取一次,合并上清液。 将合并后的上清液用乙腈饱和正己烷25 mL脱脂净化,弃去上层溶液,下层液移至100 m...
查看详情1. 前处理 (1)液-液提取净化法 动物肝脏、肾、肌肉、水产品:称取5 g试样,精确至0.01 g。置于50 mL棕色离心瓶中,加入25 mL乙腈和无水硫酸钠,于液体混匀器中快速混匀1min,均质后以3000 r/min离心5min,将乙腈层移入100 mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25 mL乙腈摇匀,于3000 r/min离心5 min,合并乙腈提取液。 牛奶:称...
查看详情1. 样品提取 取充分均质的组织样品10 g于100 mL玻璃离心管中,加入20 mL 0.1 mol/L乙酸缓冲溶液,20 mg葡萄糖醛酸酶和蛋白酶,于均质器上均质1 min,置于培养箱中60培养1 min。冷却后加入15 mL 200 g/L三氯乙酸(采用广范围试纸,调pH1.5),在超声水浴上超声10 min。将提取液于10/15 ℃,4000 g离心15 min,若仍然存在悬浮物,温度可降低至8 ℃。倾出上清液,用20%氢氧化...
查看详情1. 提取与净化 称取匀浆的牛肝脏或肌肉2.5 g,置于50 mL离心管中,加入8 mL乙腈,润动0.5 min, 2500 r/min离心5 min,取上清液。残留组织用8 mL乙腈重复提取一次,合并两次的上清液于500 mL的离心管中,加30 mL纯水-三乙 胺(30 + 0.045),过C8SPE柱(500 mg,3 mL),用 20 mL乙腈-水-三乙胺(40 + 60 + 0.1)淋洗,吹干;再用3 mL正己烷淋洗,吹干;用2 ...
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