小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验
巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。 一、实验材料准备 1. 动物:各个品...
查看详情巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。 一、实验材料准备 1. 动物:各个品...
查看详情流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。 细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化,如G0/G1期的DNA含量为2C,而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量...
查看详情细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。 BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,经过两个细胞周期后,细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2,反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中约一半为两条单...
查看详情体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。 分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比,它是测定细胞 周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 一、Giemsa染液配制 称Giemsa粉末0.5 g,加几滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油总量为33 ml)。56℃中保温90-120分钟。加入33 ...
查看详情Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分,含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖,铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上,能在DMEM培养基中重建形成膜结构,这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。 滤膜孔径一般为8um,而且膜孔都被Matrigel覆盖,细胞不能自由穿过,必须分泌水解酶,并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜,这与体内情况较为相似。 铺有Martrigel的滤膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之间,铺有...
查看详情培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞,死细胞着色,活细胞不着色,从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应,也可测定细胞...
查看详情分析人HCC组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化水平与p53的表达及HCC临床病理参数之间的关系,评估PI3K/Akt/mTOR信号通路在HCC诊断和预后评价中的作用。 一、细胞表达检测 1. 76例HCC组织样本经临床病理分期分级。 2. 免疫组织化学方法检测HCC组织和癌旁组织中p53、pAkt、PTEN、p-mTOR和pS6的表达情况。 3. 分...
查看详情1.确定抗生素作用的最佳浓度: 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性,因此在筛选前要做预试验,确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。 1) 提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细胞8 孔,接种量以第二天长成25%单层为宜,置CO 2 孵箱中37℃培养过夜。 2) 将培养液换成含抗生素的培养基,抗生素浓度按梯度递增(0, 50, 100, 200,400,...
查看详情观察阿霉素(Doxorubicin,DOX)单用或与RAPA联合用药对HepG2和Hep3B细胞生物学行为及PI3K/Akt/mTOR信号通路活性的影响,探讨mTOR抑制剂增强HCC化疗药物疗效的相关作用机制。 一、细胞表达检测 1. 分别取对数生长期的HepG2和Hep3B细胞,以不同浓度的DOX单用或与RAPA(20 nmol/ml)联合应用培养48 h或24h。 2. 以MTT...
查看详情一、操作要领 1. 混匀操作要领 (1)火焰消毒吸管,用Hanks液冷却和湿润管内壁(这是因为刚分离的组织细胞易粘在管壁上)。 (2)吸管头插入管底。 (3)用吸管反复轻轻吹打组织块。 2. 器械的使用 (1)用工作台消毒镊子取浸泡在酒精中消毒的器械。 (2)器械置无菌干纱布内嚓一下。迅速通...
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