细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。 Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性。对PS有高度的亲和性...

发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。 一、材料与试剂准备 1.  材料：凋亡细胞。 2.  蛋白酶K（500 μg/ml）， 醋酸钾氯仿（8 mol/L），无水乙醇，70%乙醇，2%琼脂糖凝胶。 ...

本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。 三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时，即可诱导HL-60细胞凋亡，并表现出典型的凋亡特征。 ...

1.  前处理 称取10 g样品，准确加入内标溶液（13C-己烯雌酚、13C-睾酮、13C-雌二醇）（20 ng/mL）0.5 mL，加入10 mL pH5.2的乙酸钠-乙酸缓冲溶液，匀浆后，再加入β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液10 uL，于（37±1）℃振荡酶解过夜。取出冷却后，加入36 mL甲醇振荡提取30 min，转入离心管2000 g离心10 min。上清液中加入40 mL正己烷提取两次，弃去正己烷层。水...

1.  提取 取2.000 g样品于50 mL聚四氟乙烯离心管中，依次加入100 uL混合内标工作液（10 ng/mL），5～20 mL 0.2 mol/L的HCl溶液（以样品完全浸润为准）和50 uL 100 mmol/L的2-NBA溶液，振荡30 min后，反应混合物于37 ℃恒温箱中放置过夜（16 h）。 2.  净化 取出样品，冷却至室温。加入0.5...

本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 1.  说明书，耗材：DNA 制备管，小量滤器，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。 2.  RNas...

1.  分析步骤 称取10.O g样品加6 mL缓冲溶液均质2 min，再加入8 mL缓冲溶液，37 ℃过夜。在4 ℃ 4000 r/min离心15 min，取出上清液，样品中再加入8 mL缓冲溶液，同上操作。合并上清液。 上清液用2 × 10 mL正己烷脱脂两次，弃去正己烷，剩余溶液调pH值到6.0，然后过Extrulet NT20柱，平衡20 min后，加入20 mL乙酸乙酯-叔丁...

1.  提取 称取5 g（准确至0.01 g）样品于50 mL离心管中，加入20 mL乙酸乙酯，均质1 min后，超声提取5 min，再以3000 r/min的速度离心10 min，取上清液转移至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。 2.  净化 将提取液于40 ℃下旋转蒸发至近干（不能全部蒸干），用5 mL乙酸-乙酸乙酯...

1.  前处理 称取约2 g解冻试样，切成薄片并放入50 mL离心管中，加入20 mL 1%乙酸-乙腈溶液，均质1 min后放入超声波池中超声3 min， 4500 r/min离 心5 min，将上清液小心移入100 mL塑料离心管中，离心残渣用20 mL 1%乙酸-乙腈溶液再提取一次，合并上清液。 将合并后的上清液用乙腈饱和正己烷25 mL脱脂净化，弃去上层溶液，下层液移至100 m...

1.  前处理 （1）液-液提取净化法 动物肝脏、肾、肌肉、水产品：称取5 g试样，精确至0.01 g。置于50 mL棕色离心瓶中，加入25 mL乙腈和无水硫酸钠，于液体混匀器中快速混匀1min，均质后以3000 r/min离心5min，将乙腈层移入100 mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25 mL乙腈摇匀，于3000 r/min离心5 min，合并乙腈提取液。 牛奶：称...