一、传代前准备 1.  预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2.  用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3.  正确摆放使用的器械，保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 4.  点燃酒精灯，注意火焰不能太小。 5.  准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微...

培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。 1.  贴壁细胞的消化法传代： （1）吸除或倒掉瓶内旧培养液。 （2）D-Hanks液洗2～3次。 （3）向瓶内加入适量消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有...

水合氯醛腹腔麻醉，采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛，并分离、培养胰岛单细胞。 一、实验步骤 1. 一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15 分钟，无菌取出胰腺，于冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中。 2. 加入少量无菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm ...

溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260nm，在此波长下，吸光度1 A相当于一定浓度的核酸，可以通过A 260 /A 280 的比值，来测定所得核酸的纯度。 1.  将分光光度计打开，预热10分钟。 2.  将核酸溶液中取2 µl，加（或纯水）使体...

SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d，微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元，依划割程度不同分为轻、中、重3组，对照组除不进行机械性划割，其余处理同损伤组，伤后不同时间点（10，30min ， 1，3，6，12，24 h）检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。 一、实验步骤 1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放...

HE染色也称苏木精-伊红染色，它是常规染色。苏木精是一种天然染料，它本身并不能染色，在经氧化后变成苏木红才是真正的染料，苏木对细胞核的亲和力并不强，而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核，此时细胞核呈红色，只有在碱性环境中，苏木才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料，它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的，因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。 肿瘤细胞一般体积大，是正常细胞的3倍以上，核大，核畸形怪状，染色深,和分裂相多见，而且多见病理性核分裂相.肿瘤细胞排列...

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。 1）嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质； 2）细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质； 3）中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。 PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均分布蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随...

将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 一、实验材料准备 1.  动物：小鼠。 2.  试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。 3.   器械：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管...

1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过 0.8% 琼脂糖凝胶电泳测定分子量。 2.基因文库的构建。以限制性内切酶λEcoRI 消化水稻基因组 DNA12 h, 然后从胶中回收 0.5~ 8kb片段, 连接到λExCell EcoR I/ CIP载体上, 体外包装并感染受体菌NM522。 3.基因文库的鉴定。...

贴块法适用于内皮细胞产量低的、管径较小血管的内皮细胞培养，其方法较酶消化法简便、经济。但缺点使易混有成纤维细胞和平滑肌细胞，前者的贴壁时间和内皮接近，后者贴壁较内皮慢，而且会被肝素所抑制。 一、实验讨论 植块培养法适用于内皮细胞产量低的、管径较小血管的内皮细胞培养，其方法较酶消化法简便、经济。但缺点使易混有成纤维细胞和平滑肌细胞，前者的贴壁时间和内皮接近，后者贴壁较内皮慢，而且会被肝素所抑制。 而由于成...