细胞传代实验-消化法
一、传代前准备 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3. 正确摆放使用的器械,保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。 4. 点燃酒精灯,注意火焰不能太小。 5. 准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微...
查看详情一、传代前准备 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 3. 正确摆放使用的器械,保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。 4. 点燃酒精灯,注意火焰不能太小。 5. 准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微...
查看详情培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。 1. 贴壁细胞的消化法传代: (1)吸除或倒掉瓶内旧培养液。 (2)D-Hanks液洗2~3次。 (3)向瓶内加入适量消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有...
查看详情水合氯醛腹腔麻醉,采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛,并分离、培养胰岛单细胞。 一、实验步骤 1. 一周龄Wistar大鼠,断颈处死,于75%乙醇浸泡15 分钟,无菌取出胰腺,于冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗,用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织,转入青霉素小瓶中。 2. 加入少量无菌D-Hanks’液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm ...
查看详情溴化乙锭是一种荧光染料,在凝胶电泳中,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260nm,在此波长下,吸光度1 A相当于一定浓度的核酸,可以通过A 260 /A 280 的比值,来测定所得核酸的纯度。 1. 将分光光度计打开,预热10分钟。 2. 将核酸溶液中取2 µl,加(或纯水)使体...
查看详情SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d,微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元,依划割程度不同分为轻、中、重3组,对照组除不进行机械性划割,其余处理同损伤组,伤后不同时间点(10,30min , 1,3,6,12,24 h)检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。 一、实验步骤 1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤,依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜,无菌操作下取出胚胎放...
查看详情HE染色也称苏木精-伊红染色,它是常规染色。苏木精是一种天然染料,它本身并不能染色,在经氧化后变成苏木红才是真正的染料,苏木对细胞核的亲和力并不强,而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核,此时细胞核呈红色,只有在碱性环境中,苏木才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料,它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的,因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。 肿瘤细胞一般体积大,是正常细胞的3倍以上,核大,核畸形怪状,染色深,和分裂相多见,而且多见病理性核分裂相.肿瘤细胞排列...
查看详情吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。 1)嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质; 2)细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质; 3)中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。 PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均分布蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随...
查看详情将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。 一、实验材料准备 1. 动物:小鼠。 2. 试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。 3. 器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管...
查看详情1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过 0.8% 琼脂糖凝胶电泳测定分子量。 2.基因文库的构建。以限制性内切酶λEcoRI 消化水稻基因组 DNA12 h, 然后从胶中回收 0.5~ 8kb片段, 连接到λExCell EcoR I/ CIP载体上, 体外包装并感染受体菌NM522。 3.基因文库的鉴定。...
查看详情贴块法适用于内皮细胞产量低的、管径较小血管的内皮细胞培养,其方法较酶消化法简便、经济。但缺点使易混有成纤维细胞和平滑肌细胞,前者的贴壁时间和内皮接近,后者贴壁较内皮慢,而且会被肝素所抑制。 一、实验讨论 植块培养法适用于内皮细胞产量低的、管径较小血管的内皮细胞培养,其方法较酶消化法简便、经济。但缺点使易混有成纤维细胞和平滑肌细胞,前者的贴壁时间和内皮接近,后者贴壁较内皮慢,而且会被肝素所抑制。 而由于成...
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