测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。 一般过程为 1.  接种21 孔/24 孔板细胞（ 如用培养瓶时则21 瓶）。 2.  分7 组，每组3 孔（或瓶），培养一周（7 天），期间逐日检测一 组，计数。 3.  把7 天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。 1.  悬液制备 ...

将自皮质切除的组织快切成碎块，冲洗后放入胶原蛋白酶和胰蛋白酶混合液，摇晃消化。定时用吸管研磨组织块，然后手机分离的细胞。用一定孔径大小的滤网过滤细胞悬液，除去未消化的组织块。然后，洗细胞，清除消化酶。用添加血清的培养液混悬细胞，将细胞接种于塑料培养器皿。 一、材料 无菌 1. 基础培养液：DMEM 和 F12 混合液 50：50 2. FBS（Sterile Systems,...

一、材料 灭菌物品 1. D-PBSA 2. 多孔培养板：6 孔，35 mm 非消毒物品 1. Tris-缓冲液：Tris-HCl，0.1mol/L，pH8.0 2. Tris/三硝基甲苯（Triton）：Tris-HCl，0.1mol/L，pH8.0，0.1%TritonX-100,4℃ 储存 ...

胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择（第3步），在有bFGF存在的情况下扩增（第4步）并最终分化在第5步。细胞全程培养在37℃，5％CO2，100％湿度条件下。一般体外诱导向神经细胞方向分化，也可以采用低浓度的RA进行诱导。 一、ES培养基 在LIF存在的条件下维持细胞培养。 二、EB培养基 ...

非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体，其他多数染色体难以确认，而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹，以辨认全部染色体。GTG即G带，Trypsin（胰酶），Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更疏水状态。由此可知，...

在不附加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内外环境中的水会结成冰晶，能导致细胞发生一系列变化，如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变、蛋白质变性等等，最终导致细胞死亡。 但如向细胞培养液中加入保护剂甘油或二甲基亚砜（DMSO），可使冰点降低，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，可避免上述现象的发生。 冻存在－135 ℃以下低温中，能减少冰晶的形成。而融化细胞时速度则要快，使之迅速通过最易受损的－5~0 ℃以后，细胞活力不受损害，仍能生长增殖。当前最常用的...

一、分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank’s平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。 二、 用解剖刀将其切成1 mm 3 大小的组织块。 三、用1ml枪头转移250 μl胶原酶储存液（1.33%，溶于L-15中）到1ml的L-15（或D-MEM）中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5 ml稀释胶原酶液。 ...

一、 取14.5d SD大鼠一只。 二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手术台上，酒精棉球消毒皮肤，开腹取出子宫（约12-14个），放入解剖液中，剖开子宫，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之间离断，取头侧部组织，去除脑膜组织，取原始中脑区组织，放入离心管装的解剖液中，待全部取出后，1500转2分钟。 三、 用吸管吸出上清液，在组织细胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室温30分钟，150...

异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的，因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近，或在染色体臂上呈现“团块”，这些染色质主要由C显带技术呈现，故称为C带。CBG即C带、Ba（OH）2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA，但在C带区有很强抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可见效果良好的C带。 抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先，酸处理可使DNA脱嘌呤，但未使DNA骨架断裂；其次热碱处理可使DNA变性，促进继发的DNA溶解；最后，热盐...

一、原代培养 1.  选用生后1周的新生大白鼠，用碘酒,酒精棉球消毒，断头取其大脑皮层组织。 2.  解剖显微镜下，剥离脑膜，切除大脑髓质部分。 3.  将大脑皮质在无Ca 2+ 、Mg 2+ Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。 4.  室温下静置1...