细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。 ...

1.平板克隆形成试验 本法适用于贴壁生长的细胞，包括培养的正常细胞和肿瘤细胞。 (1)对指数生长期细胞，采用常规消化传代方法，制成细胞悬液。 (2)细胞悬液反复吹打，使细胞充分分散，单个细胞百分率应在95%以上。细胞记数，并用培养基调节细胞浓度，待用。 (3)根据细胞增殖能力，将细胞悬液倍比稀释。一般按照每皿含50、100、200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿...

取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板，37 ℃，5% CO2 培养箱中孵育后，荧光显微镜下计数吞噬百分率和吞噬指数。 一、讨论 巨噬细胞一般没有特殊的鉴定方法，有两条经验： 1. 巨噬细胞是终末分化细胞，不会增殖 2. 很难消化下来，所以接种的时候，必须直接接种到目的培养器皿中。 一、实验步骤 ...

采用“组织悬块一次吸入摇匀法”进行细胞培养及“多次消化传代，反复贴壁法”来分离、纯化人滑膜细胞，达到形态学上的纯化要求，减少了操作步骤和污染的机会，为滑膜病理研究提供了一个有力的工具。 一、讨论 1. 虽然国内外文献有组织块培养法获得滑膜细胞，但作者试验过，没有获得滑膜细胞，可能方法没掌握好或实验条件不同。 2. 我探索过用0.25% trypsin 或0.25% trypsin＋0.02% E...

通过光镜观察细胞形态、电镜观察超微结构及检测培养上清白蛋白水平证实培养细胞为肝细胞，持续培养结果显示原代培养第6～12 d 左右为肝细胞功能最佳观察和实验阶段。 一、实验步骤 1. 将小鼠断颈致死，置 75%酒精泡2-3 秒钟，取肝脏，置于盛有 PBS 的平皿中。 2. 剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有 PBS 液的平皿中。 3. 用手术剪将脏...

运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养，并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。 一、实验步骤 1. SD 大鼠(150-200 g)，断头，浸入75%的酒精中15 min。 2. 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主动脉、腹主动脉， 摘出。 3. PBS 清洗3 遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内...

将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 一、实验材料准备 1.   滑膜组织：将外科手术切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中，在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。 2.   试剂：4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM配制)，培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。 ...

浸润性生长是细胞浸入或穿透其它组织增殖生长能力，浸润生长性检测是检测癌性细胞的一项有意义的指标。检测方法需用其它正常组织和癌细胞共同培养，观察癌细胞向正常组织浸润生长的情况。 常用鸡胚皮肤或心肌组织块，作为被浸润生长的对象；今 以鸡胚皮肤为例，培养过程如下 1.  程序 （1）鸡胚浸出液制备 （2）琼脂层制备 ...

近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段，可进行多项柱测，如细 胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等，效果极好，已取代了应用同位素等繁琐方法。 培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象，程序简单、怏速、效果准确。 1.  细胞 80 %接近合细胞； 2.  悬液制备 用消化法制备成单细胞悬液（细胞数量...

测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。 一般过程为 1.  接种21 孔/24 孔板细胞（ 如用培养瓶时则21 瓶）。 2.  分7 组，每组3 孔（或瓶），培养一周（7 天），期间逐日检测一 组，计数。 3.  把7 天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。 1.  悬液制备 ...