本书的设计初衷是提供组织培养操作程序的信息手册，同时提供一些实际方案中的背景资料和操作过程中的原理解释。无论如何，有必要为人们提供一本组织培养技术培训的教程。一个独立的工作者可以根据他的需要来阅读本书的某些部分；经验有限的学生或正在接受培训的技术员，则可根据其以往经验和导师的要求从中获得推荐的训练教 程。编写这一章的目的即是为培训新手的教师提供初级或高级水平的教程。 这一教程由一系列标准格式的练习组成，包括相互参考的操作程序和背景知识。在练习中不会重复...
查看详情1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm专用塑料试管中。 2. 加入50μl特异的单克隆抗体（一抗），室温下孵育30min。 3. 置Q-PREP仪上溶解红细胞，稳定和固定白细胞。 4. 离心（800～1000rpm，5min）弃上清液，用PBS洗涤细胞2次。 5. 加入50μl荧光（FITC或PE）标记的第二抗体，室温下避光染色30min。 ...
查看详情目前制备全血细胞样品的方法很多，且很成熟，常用的方法是用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，然后进行特异性荧光染色，其染色方法与前面介绍的方法相同。下面主要介绍与流式细胞仪配套的Q-PREP（免疫学样品处理器）进行快速制备微量全血样品的方法。 1. 取肝素或EDTA抗凝全血（100μl/份），置12×75mm专用塑料试管中。 2. 每份加入20μl特异性荧光单抗，另一份加入荧光标记的无关单抗作同型对照，室温下避光染色15min。 ...
查看详情根据实验方案诱导细胞凋亡，制备单细胞悬液，使用 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒，通过Annexin V抗体与磷脂丝氨酸（PS）的特异性结合来检测细胞凋亡的情况。 1． 将10×的结合缓冲液用蒸馏水稀释成为1×，冰育。 2． 悬浮细胞在低温环境中，用PBS洗涤细胞2次（800～1000rpm离心，5min）。 3． 弃上清，加入490μl预冷的结合缓冲液重悬细胞（细胞浓度为105～...
查看详情DNA是细胞内含量比较恒定的参量，随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料（如PI）可选择性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的双螺旋碱基之间，与细胞特异性结合，DNA含量与荧光染料的结合量成正比，因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。 1． 将固定过的细胞离心（500～1000rpm，5min）弃上清液，再用PBS洗涤2次。 2． 用PBS调整细胞浓度，每份为1×106个细胞/100μl。 ...
查看详情Calcein acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一种胞浆荧光标记物，本身无荧光，渗入细胞后细胞内酯酶催化生成的水溶性绿色荧光物质不易透出细胞。靶细胞用其标记后与效应细胞共育，再加Fluoro-Quench试剂（一种以Ca2+螯合的小牛血红蛋白主要成分、还含溴化乙啶试剂，它对细胞无毒，不能进入活细胞但可能进入膜已破损的死细胞），淬灭培养液中的荧光，在板式荧光扫描仪上定量测定活细胞内的荧光强度，与靶细胞对照孔（代表细胞100%存活）比较。即可计算效应细胞杀伤靶细胞...
查看详情乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化合物，在490nm或570nm波长处有一高吸收峰，利用读取的OD值，经过计算即可得NK细胞活性 ...
查看详情NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下，获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功 能，在过继免疫治疗肿瘤中已得到广泛的应用。 通过将同位素51Cr掺入到NK的靶细胞K562（红白细胞白血病细胞）或LAK的靶细 胞LiBr（黑色素瘤细胞），按一定细胞比例与效应细胞（NK或LAK...
查看详情在体外，内皮细胞在内皮细胞生长因子存在的条件下可迅速增殖，并可传代，可作为内皮细胞增殖，细胞因子分泌、表型等研究的模型。 一、脐带内皮细胞的分离 1. 脐带收集 用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有 4 ℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4 ℃放置不应超过24 小时。 2. 脐带内皮细胞分离...
查看详情T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD2、抗CD3 McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现，integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。目前临床上最常选用P...
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