根据实验方案诱导细胞凋亡，制备单细胞悬液，使用 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒，通过Annexin V抗体与磷脂丝氨酸（PS）的特异性结合来检测细胞凋亡的情况。 1． 将10×的结合缓冲液用蒸馏水稀释成为1×，冰育。 2． 悬浮细胞在低温环境中，用PBS洗涤细胞2次（800～1000rpm离心，5min）。 3． 弃上清，加入490μl预冷的结合缓冲液重悬细胞（细胞浓度为105～...

DNA是细胞内含量比较恒定的参量，随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料（如PI）可选择性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的双螺旋碱基之间，与细胞特异性结合，DNA含量与荧光染料的结合量成正比，因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。 1． 将固定过的细胞离心（500～1000rpm，5min）弃上清液，再用PBS洗涤2次。 2． 用PBS调整细胞浓度，每份为1×106个细胞/100μl。 ...

Calcein acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一种胞浆荧光标记物，本身无荧光，渗入细胞后细胞内酯酶催化生成的水溶性绿色荧光物质不易透出细胞。靶细胞用其标记后与效应细胞共育，再加Fluoro-Quench试剂（一种以Ca2+螯合的小牛血红蛋白主要成分、还含溴化乙啶试剂，它对细胞无毒，不能进入活细胞但可能进入膜已破损的死细胞），淬灭培养液中的荧光，在板式荧光扫描仪上定量测定活细胞内的荧光强度，与靶细胞对照孔（代表细胞100%存活）比较。即可计算效应细胞杀伤靶细胞...

乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化合物，在490nm或570nm波长处有一高吸收峰，利用读取的OD值，经过计算即可得NK细胞活性 ...

NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 　　 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下，获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功 能，在过继免疫治疗肿瘤中已得到广泛的应用。 　　 通过将同位素51Cr掺入到NK的靶细胞K562（红白细胞白血病细胞）或LAK的靶细 胞LiBr（黑色素瘤细胞），按一定细胞比例与效应细胞（NK或LAK...

在体外，内皮细胞在内皮细胞生长因子存在的条件下可迅速增殖，并可传代，可作为内皮细胞增殖，细胞因子分泌、表型等研究的模型。 一、脐带内皮细胞的分离 1.  脐带收集 用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有 4 ℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4 ℃放置不应超过24 小时。 2.  脐带内皮细胞分离...

T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD2、抗CD3 McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现，integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。目前临床上最常选用P...

活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞 表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性 百分率即可知相应抗原的密度和分布。 一、附录 1.  DPBS （×10， 贮存液） NaCl 80 g， KCl 2 g，蒸馏水加至1000 ml， ...

APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗 鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的第一抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆 抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-anti AP-AP的复合物。还可 通过二抗将APAAP 复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上第一 ...

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（<20 mosm/kg H 2 O）， 粘度也很小，可形成高达1.3 g/ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心 力（200～1000 g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数 低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广 ...