方案 21.8 多孔培养板中单层培养细胞生长曲线的绘制实验
以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞,在达到平台期之前,每天计数一个板中的细胞。 材料 无菌 单层细胞培养:A549、Vero 或 HeLa-S3, 75 cm 2 培养瓶,晚对数期 1 瓶 0.25% 粗制胰蛋白酶混合有 10 mmol/L EDTA 5 ml 生长液,100 ml, 伴有 2...
查看详情以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞,在达到平台期之前,每天计数一个板中的细胞。 材料 无菌 单层细胞培养:A549、Vero 或 HeLa-S3, 75 cm 2 培养瓶,晚对数期 1 瓶 0.25% 粗制胰蛋白酶混合有 10 mmol/L EDTA 5 ml 生长液,100 ml, 伴有 2...
查看详情开始一系列的培养,每天在一定的时间计数细胞直至它们到达平台期。 材料 无菌 单层细胞培养,A549,Vem 或 HeLa-S3, 75 cm 2 培养瓶,晚对数期 1 瓶 0.25% 粗制胰蛋白酶,混合有 lOmmol/L EDTA 5 ml 生长液,含 2 mmol/LNaHC0 ...
查看详情材料 无菌 细胞培养,如 1X10 4 ~ 1X10 6 个细胞,24 孔板 3 H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (~50uCi/ml) (特异活性并不重要,因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定) 非无菌 ...
查看详情当前培养细胞既可可在国内相互寄赠,也可进行国际间的交流,为此要有运输细胞的方法。装运方法有两种:一是用液氮或干冰保存,效果较好,但需用特制容器如小液氮罐等,又因液氮和干冰蒸发均能较快,适于空运,比较麻烦;另为充液法,比较简便。 充液法,装运过程如下 1. 选生生状态良好的细胞,待达80%或90%汇合时,去掉旧培养液换入新培 养液,量要达到培养瓶的颈部(过满易污染),保留少许空间,塞紧瓶塞; ...
查看详情用3H -TdR 标记细胞,提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平 材料 无菌 处于合适时期的细胞(若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中,若用其他方法,细胞可培养于常规的塑料皿中) 3 H-TdR ,0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml),每毫升培养液用 lOOul 提示 ...
查看详情溶解蛋白质,与染料混匀,l0min 后阅读 O.D.。 材料 十二烷基硫酸钠(SLS,SDS),水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考马斯亮蓝 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%),溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸:将 100 mg 考马斯蓝溶于 50 ml 95% 乙醇,加人 100 ml 85% 磷酸;然后以 1L 水稀释。 蛋白...
查看详情在缓冲液中匀浆细胞或组织,继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀,测定其荧光。 材料 非无菌: 缓冲液:0.05mol/LNaPO4;2.0mol/L NaCl,pH7.4 , 含 2 X l0 -3 mol/L EDTA 。 Hoechst33258;缓冲液中,100ng/ml 以上的 DNA 用 lug/ml,10~100ng...
查看详情目的 制备复杂溶液及热不稳定试荆和培养钱的灭曲 训练目标 过滤的技术和容址的正确选择。比较正压和负珠过滤,监督:指导培养幕的制备。在过滤的初始阶段连续监督,在过滤过程中间歇监份,在抽样质量控制时连续监督。 时间:2h。 背景信息 以干粉配制培养地储液(见方案11.9).过滤灭菌(见11.5.2节.方案11.12);可供选择的...
查看详情目的 制备一系列色阶,与实验室通常使用的比色卡很相似,含有简单的培养基或带酚红的盐溶液,调节其pH范围使之包含培养中常见的pH范围。 应用 在制备培养墓以及换液或传代前川于参照估计pH。 训练目标 熟悉酚红作为pH指示剂的使用.用注射式过渡器灭菌。 监督:开始时连续监督,在之后直到操作完成,可以减少监督。 ...
查看详情目的 在常压下使用的等渗盐溶液的制备。 应用 用于稀释浓缩液.如稀释2.5%腆蛋白酶;胰蛋自酶消化前的预漂洗,收集细胞或换试剂时的清洗溶液。因为它不含Can+和Mg汁,NaHCO3或葡萄糖,所以不适合长时间孵育。 训练目标 简单盐溶液的构成。渗透压.缓冲液和pH控制。利用高压灭菌锅消毒热稳定溶液。 监督:...
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