在用一般方法难以确定时，可做电镜检测。 1.  细胞培养 48～72 小时。 2.  接近汇合前，用0.05%～0.25%胰蛋白酶消化细胞5～10 分钟。 3.  用吸管轻轻吹打，制备成细胞悬液。 ...

荧光显微镜检查法，荧光染料用 Hoechst 33258，它是一种能与DNA 特异结合的荧 光染料。支原体内含有DNA，能着色，是现有检测法中最方便和最有效的一种。 1.  标本 盖片培养细胞汇合前从瓶中取出（如细胞已完全汇合，能影响对支原 体的观察）； 2.  漂洗 将细胞盖片置于碟皿中，用不含酚红的Hanks液漂...

本法为固定染色法，简便易行，标本可长期保存，不仅适于检测支原体，亦可用于检测真菌和细菌。 1.  取材 用支持物盖片培养法或培养液均可；用培养液时，先吸取培养液1 毫升， 500～800 转/分，离心5 分钟后去上清，余0.2 ml备用。 2.  低涨处理 用新鲜配制的0.5 %的枸橼酸溶液，处理盖片细胞或加入到1项0.2 ml ...

1.  标本制备 用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小 时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大 盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片 法观察亦可。 2.  观察 相差显微镜油浸下观察，支原体呈暗色微小颗粒，有类似布朗运动的...

萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。 将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。 材料 无菌 受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞 合适的生长液 20ml 0.25% 胰蛋白酶 5ml D-PBSA10ml 非灭菌 ...

细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。 材料 无菌 培养细胞 生长液 0.25% 粗制胰蛋白酶 D-PBSA 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷，2.0MBq/ml (约 50uCi/ml)，75 GBq...

快速复苏细胞，缓慢稀释，以高细胞密度重新接种（图20.9）。 材料 无菌 培养瓶（如果需要离心时） 生长培养基 吸量管，1ml，10ml 注射器和19号针头（如果你使用玻璃冻存管） 非灭菌 保护性手套和面罩 37℃无菌水，10cm深...

1.  取5 ml 液体培养基加入一支无菌的16 mm 或18 mm 的培养试管中。 2.  用接种环挑一个单菌落，浸没于培养液中并轻轻振动接种环，使待接种的细菌分散在培养液中。 3.  盖好试管，在摇床或转鼓式培养装置上以60 r/min 速度。 4.  于37 ℃培养至饱和（约6 h）新鲜培养至饱和期的培养液细菌浓度大约为1X10 9 ...

悬浮培养是使贴附性细胞呈悬浮状态生长。如所培养的细胞本身属悬浮生长类型， 则无须做任何处理，在传代时先做离心处理去除旧培养液，添加新培养液即可。但在培 养贴附型细胞时，因其有贴附性，必须进行干扰使细胞不能贴附，才能形成悬浮状态生 长的细胞。 1.  用大培养瓶增加含有铁芯的无毒的聚苯乙烯棒，在培养 中进行电磁搅拌，使细胞不能贴壁而成悬浮培养，为此必须拥有能容纳电磁搅...

大多数培养细胞都具有贴附在底物上生长成单层细胞的性质，如细胞长成片之后， 让细胞片与底物脱离，更换到使细胞不易贴附的底物上继续生长时，则细胞片能卷聚成 球体形，成为球体培养。 球体细胞也可和单层细胞混合培养，便于研究两种不同细胞的相互影响。方法是 1.  先做单层培养，待细胞长成单层细胞后，把2 %琼脂培养液注入瓶内，令其在单层细胞 上面...