文章资讯

方案11.4过滤装置的灭菌

1. 用清洁剂完全淸洗后,用水冲洗过滤装置,然后用去离子水冲洗,并晾干。 2. 在过滤器中插入滤板,然后将过滤膜放到滤板上,如果过滤膜是由多聚碳酸盐制成的,要弄湿以消除静电。 3. 将预过滤器(玻璃纤维和其他需要的物质)放在过滤器的顶端。 4 . 安装过滤器支架,不要完全拧紧(可以留一个螺圈)。 5. 过滤器的进口与出口均用铝箔封住。 6. 用消...

查看详情

培养细胞的电子显微镜观察实验

做透射电镜观察需进行切片、固定和包埋细胞过程,与一般组织切片法大体相似,其最大的难题是如何把细胞完整无损地从培养瓶皿壁上包埋下来。自从定型产品塑料薄膜问世后,这一困难已被克服。应用无菌塑料薄膜是极其理想的支持物,比用盖玻片、微孔滤纸、云母和卵壳膜等支持物都好。把细胞直接培养在塑料薄膜上,不仅细胞生长效果好并可与细胞一起包埋切片,免除了很多麻烦。若利用其它材料不仅不利细胞生长,最大缺欠是在包埋前需把细胞从支持物上分离下来,增加了工作量。 一、透射观察法 ...

查看详情

方案27.14 报告基因:β-半乳糖苷酶的原位染色实验

一、材料 非消毒物品 1. D-PBSA 2. 底物:X-gal(nvitrogen),以二甲基甲酰胺配成 20 mg/mL,用多聚丙烯管-20℃ 避光保存,最长可达 6 个月 3. 固定液:1.8% 的甲醛和 0.05% 戊二醛,均以 PBSA 液配制;将 85 mL 水、10 mL 的 10×D-PBSA、5 mL 福尔马林(37% 甲醛溶液)及 0.2 mL 戊...

查看详情

培养细胞的染色实验-吖啶橙染色荧光观察法

吖啶橙(Acridine Oringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或 固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。 吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10 -4 ~1×10 -4 可用于直接染色观察法更好。 1.  用盖片单层培养细胞,从瓶中取出后速用温Hanks...

查看详情

培养细胞的染色实验-Feulgen染色法

此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细 胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱 脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合 物。 本方法中酸的离解根重要,若温度过低、或酸度不够,醛基暴露不充分,染色会过 浅;反之,酸解过...

查看详情

培养细胞的染色实验-苏木精伊红染色法

1.  37 ℃温BSS漂洗3 次,每次20 秒~1 分钟;中性福尔马林固定30 分钟; 2.  先用蒸馏水漂洗1 次;再用蒸馏水稀释的苏木精液(1/20)染10 分钟; 3.  自来水洗、置入1 %NaHCO 3 液中漂洗至蓝紫色; 4.  伊红水溶液中染30 秒~1 分钟; 5.  ...

查看详情

培养细胞的染色实验-Giemsa染色法

Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。 1.  染液制备 (1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合, 研磨至无颗粒; (2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色 瓶内。 ...

查看详情

肿瘤细胞培养实验-提高肿瘤细胞培养存活率和生长率的实验

根据人们的经验,肿瘤细胞在体外不易培养,建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。 当肿瘤组织或细胞初代接种培养后,常出现以下几种情况: 1.  完全无细胞游出或移动; 2.  有细胞移动和游出,但无细胞增殖,细胞长时间处于停滞状态以致难以传代; 3.  有细胞增殖,传若干代后停止生长或衰退死亡; 4.  传数代后细胞增殖缓慢...

查看详情

方案18.3 细胞增殖的密度限制实验

细胞在无限制培养基中培养,生长至包和密度。用放射自显影测定 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷标记细胞的百分比。 一、材料 无菌 1. 准备用于传代的细胞 2. 生长培养基 3. 维持培养基(无血清或生长因子),含有 37KBq/ml(1uCi/ml)的 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷,74 GBq/mmol(2Ci/mmol) 4. D-PB...

查看详情

白细胞分类计数实验

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片,用复合染料染色,根据各类白细胞形态特征予以分类计数,得出相对比值(百分率),经观察数量、形态和质量的变化,对疾病有辅助诊断意义。 临床意义 1. 增多 (1) 中性粒细胞:急性化脓感染,粒细胞白血病,急性出血,溶血,手术后,尿毒症,酸中毒,急性汞中毒,急性铅中毒等。 (2) 嗜酸性粒细胞:变态反应,寄生虫病,某些皮肤病,某些血液病,手术后,烧伤等...

查看详情