细胞层（buffy coat）或另一种混合细胞悬液同与抗体连接的微珠混合，稀释后放人一个磁性分离柱中。与微珠结合的细胞会贴到柱子的侧壁上，而未结合磁珠的细胞则流过柱子。将分离柱从磁场移开，结合微珠的细胞就从柱子上释放，用针栓从柱中收集。 一、标记 1. 标准方法分离外周血单核细胞或经酶消化法及其他方法制备的细胞悬液。 2. 用 Ficoll-Paque 去除死细胞。 3. 用...

将细胞依次置于浓度逐渐增加的叶酸拮抗剂中，如氨甲蝶呤（MTX ) 中，经过一段时间，细胞会产生对药物毒性的抵抗 [ Biedler et al，1972 ]，这是 DHFR 基因扩增的结果，这种抗性通常产生得非常快，当然可能还有其他机制部分或全部参与到抗性表型的形成中，比如，抗叶酸转运方面的改变和（或）突变影响酶结构或亲和力。 1. 克隆培养亲代细胞形成生长旺盛、基因型一致的细胞群体，用于筛选。 2. 用无菌 NaCl 0.15 mo...

将培养瓶倒置放于 X 射线机或 60Co 源下，用铅块遮蔽需要的集落。 1. 选择想要的集落，用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔做记号。 2. 选出一块大小适当的铅块。 3. 将培养瓶拿至放射源处。 4. 将培养瓶倒置放于放射源下方。 5. 用 2 mm 厚的铅块（用 2 mm 厚的铅条切出的直径约 2~5 mm 大小的铅块）遮蔽需要的集落。 ...

1.  吸取浓度为2×10 7 细胞/ml 的细胞悬液10 μl，滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中，使细胞静置30 min。 2.  将玻片放入玻片架，浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中，室温固定 20 min。 3.  将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中，放置2 min（此步终止PFA固定作用）。 4.  将玻片架移至一...

这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。 1.  往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的LB培养基，然后加入5 ml 过夜培养的。 2.  带有所需质粒的大肠杆菌培养物，再于37℃培养至饱和状态（OD 600 ≈4）。 3.  于4℃，6 000 g 离心10 min，用4 ml GTE。 ...

收集对数生长晚期的同源或异源细胞系的培养基，过滤，根据需要用新鲜培养基稀释。 离心、冻存、解冻、过滤，这些步骤都有助于避免从原培养瓶中携带细胞。如果克隆培养的细胞与条件细胞是同一种细胞，这个问题就轻一点。但是用不同细胞系或原代小鼠成纤维细胞作为条件细胞可能更有利于克隆培养。如果用这种方法建立细胞株，细胞的性质必须经过鉴定（见方案16. 10、方案 16. 11、方案 16. 12)，排除因条件培养基而引起的细胞交叉污染。 1. 条件细胞（...

从悬浮细胞培养物中吸取样品，细胞计数，接种适量的悬浮细胞至新培养瓶的新鲜培养基中，使细胞浓度与开始培养时一致。 1. 准备好超净台，将试剂及材料放于超净台上准备开始实验。 2. 仔细检査培养物有无污染或衰退迹象。这一步骤对于悬浮培养物来说比单层贴壁细胞更难，细胞状态不好时表现为皱缩，外形不规则和（或）颗粒化。 健康的细胞干净而透明，在相差显微镜下核清晰可见，而且静置培养时常常可见小细胞团。 ...

在 25 ml 缧口盖离心管中加人6 ml Ficoll-Hypaque溶液，将 9 ml 含 2×107 个细胞的培养基加在上面，离心，从交界部位收集活细胞。 1. 让悬液中大的组织团块沉降。 2. 把 9 ml 的细胞悬液（细胞团尽量少）加在6 ml 的Ficoll （Ficoll/metrizoate 调至 1.077g/ml）泛酸溶液上面，此步骤应在广口、透明有盖的离心管中进行，如 25 ml 无菌离心管或Nunclon普通容...

一、实验步骤 1.  接种一个单菌落于5 ml 培养基中，于37℃培养至饱和状态。 2.  取1. 5 ml 菌液离心20 s 加入300 μl 200 μg 溶菌酶的STET溶液，在旋涡混合器 上振荡混匀，冰上放置30 s~10 min。 3.  将管放入沸水中（100℃）1~2 min 离心15~30 min，吸出上清移入一个新的微量离心管中。 ...

羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以检验胎儿核型。 1.  抽取羊水 无菌抽取羊水10～20 ml，立即注入无菌离心管中； 2.  离心分离 1000 转/分，离心10 分钟，去上清，留0.5 ml； 3.  培养 加培养液4 ml（含小牛血清1 ml），用NaHCO 3...