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方案11.15 血清的收集与灭菌

收集血液,使其凝固,分离血清。通过孔径逐级减少的过滤器过滤血清。分瓶,包装,冷冻保存。一、收集 可以从屠宰场收集全血。应直接收集从动物体中流出的血液,收集后妥善放置再分开。或者,在兽医的指导下从活动物身上直接取血。如果选择后一种方法,并用同组动物连续取血,可得到重复性较好的血清,但量很少,花费却很大。如果操作非常仔细,可做到无菌收集。二、凝固 将血液放在密闭容器中,4°C过夜,可形成凝块,这被称作自然凝固血清,它比通过离心和脱纤维蛋白等物理方法分离血细胞要好,因为在形成凝块的过程中...

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方案11.14 用大型串联式过滤器灭菌过滤

1. 安放好过滤架(保护滤器的夹子和夹子架(除非滤器架子有腿))。 2. 将出口与接受瓶(底部有出口的过滤接受容器)相连。 3. 将过滤器(如 90 mm 膜和可重复使用的过滤器支架,或一次性碟式过滤器或筒式过滤器)的出口放到合适的高度,使收集培养基的瓶子(培养基瓶,铝箔包裹,干热法灭菌)正好位于过滤器下方,瓶口可被钟罩盖住,并且当装满的时候可以很容易地将瓶子取出。如果需要,可先用一个无菌培养瓶进行调试,但最后不要用这个瓶...

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方案11.13 用小型串联式过滤器灭菌过滤

1. 将管(硅树脂管,与蠕动泵相配,接至滤器接口)与蠕动泵(最好有底部开关)相连。 2. 将上游端插入待过滤的培养基中。 3. 打开过滤器包装,与蠕动泵出口相连。 4. 将过滤器(带罩的串联式过滤器)夹在架子(固定滤器)的合适高度,使收集培养基的瓶子(有刻度的培养基瓶,铝箔包裹,干热法灭菌)正好位于过滤器的下方,瓶颈可被盖住,并且当装满的时候可以很容易地将瓶子取出。如果需要,可先用一个无菌培养瓶进...

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质粒DNA的小量制备实验-碱裂解小量制备法

1.  接种一个单菌落于5 ml 无菌LB培养液中,在37℃培养至饱和状态(OD 600 ≈4)。 2.  取1.5 ml 培荞液离心20 s 沉淀用100 μl 溶液重悬并于室温静置5 min。 3.  加入200 μl NsOH/SDS溶液,混匀。于冰上放置5 min。 4.  加入150 μl 乙酸钾溶液,在旋涡混合器上搌荡2 s,于冰上...

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方案11.11 用注射器式过滤运菌过滤

1. 擦洗罩子和包装材料。 2. 将注射器装满待灭菌的溶液。 3 . 打开收集容器的盖子。 4 . 打开过滤器的包装,将其与注射器的尖端相连,连接时用包装的下半部来同定灭菌过滤器。 5. 将溶液通过过滤器排到收集容器中,只谣轻轻用力。 6 . 盖好收集容器。 7. 弃去注射器和过滤器。 注意...

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方案11.10 特制培养基的配制

配制储存浓缩液并冷冻保存。需要的时候解冻、混合、无菌过滤、保存。 1. 将溶液解冻,确保所有溶质均溶解。 2 . 按正确的比例将各成分混合: (a) 氨基酸浓缩液 100 ml (b) 酪氨酸和色氨酸 200 ml (c) 维生素 10 ml (d) 葡萄糖 100 ml 3. 混合后过滤灭菌。 ...

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刀豆球蛋白A(ConA)凝集实验

刀豆球蛋白属凝集素:凝集素(Lectin)是一类可结合特定糖基的蛋白质。每个凝集素分子有两个以上的结合位点。癌细胞和转化细胞所需凝集素的浓度比正常细胞低,这可能与细胞表面凝集素受体分布有关;正常细胞分散,癌细胞较集中,结合性增强。 1.  细胞悬液制备 用pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)制成每毫升含10×10 4 个细胞的悬 液; ...

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方案11.9 用干粉配制培养基

用适量的超纯水将包装中的干粉全部溶解:将容器放到磁力搅拌器上,边搅拌边加干粉。当所有的成分完全溶解后,培养基应立即过滤不能放置,否则会产生沉淀或有微生物污染。当最后的成分(如,谷氨酰胺、NaHCO3或血清)加完后,最好调整pH 。 1. 在容器中加入适量的超纯水。 2. 放入磁力搅拌子。 3. 将容器放到磁力搅拌器上,设定转速为 200 r/min。 4. 打开干粉的包装,将干粉慢慢...

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