1. 参照 ABI 的操作步骤，为待扩增样品准备足量的混合物，每个样品管包含： (a) AMPF/STR ® PCR 反应混合物 21 μl (b) AMPF/STR ® SGM Plus ® 引物一套 11 μl (c) Amplitaq gold ...

一、开始实验前，必须准备以下试剂： (a)蛋白酶溶剂溶解：向 Qiagen ® 冷冻干燥的蛋白酶中加适量蛋白酶溶剂。该溶液 2~8°C 保存 2 个月内稳定。 (b)AW 1 和 AW 2 缓冲液：向装有 AW 1 和 AW 2 浓缩液的瓶子中加人适量无水乙醇。AW 1 和 AW 2 缓冲液室温下一年内稳定。 (c)AL 缓冲液：用前颠倒充分混...

用标记的 M13 mp9 DNA 与 Southern 印迹后的细胞 DNA 杂交，严格冲洗后，通过放射自显影技术，观察与 M13 序列结合的DNA 片段分布图谱 [ Westneat et al.，1988 ] 。 1. 在聚乙烯三明治盒中，把膜（最多三张膜）放入 200 ml 55°C 预热预杂交液（0.263 mol/L 磷酸氢二钠；7 % （W /V）SDS，1 mmol/L EDTA，1 % （W / V）BSA 片段 V （Roche））中。 ...

用随机引物延伸法标记 M13mp9 DNA [ Finberg and Voglstein，1983 ]，并用葡聚糖柱（Sephadex） 纯化。 1. 在无菌小管中，将 2 μl 稀释的 M 13 DNA （0.25 ng/μl Boehringer Mannheim，以 1:4稀释于蒸馏水中）和 11 μl 蒸馏水混匀。 2. 将小管置于沸水浴 2 min。 3. 直接将小管放入冰中 5 min。 ...

细胞中提取的 DNA 经限制性酶消化，利用 Southern 印迹技术将消化产物固定在尼龙膜上 [ Ausubel etal.，1996，2002 ]，与来自 M 13 噬菌体的标记 DNA 进行杂交。 1. 约10 7 个细胞（用细胞刮或胰蛋白酶消化收集）用 D-PBSA （不含 Ca 2+ 和 Mg 2+ 的磷酸盐缓冲液...

打开显微镜，校准光路。在标本有关区域聚焦。检査相机与电脑的连接，将光导向相机，聚焦，保存图像。 1. 准备照相用的培养物（确保培养物没有碎片一如在照相前更换原代培养液） (a)培养瓶培养 i)将培养瓶拿到超净台中，松开瓶盖，冷却培养物。 ii)当培养物温度为室温时，盖紧瓶盖。可避免冷却引起的变形。 iii)转动培养液冲洗培养瓶顶部的内面，移除可能形成的冷凝物...

1. 吸去并弃掉培养基。 2. 用 D-PBSA 冲洗单层细胞，弃掉冲洗液。 3. 每 25 cm 2 加入 D-PBSA / 甲醇 5 ml，静置 2 min，弃掉 D-PBSA / 甲醇。 4. 加入新甲醇 5 ml，静置 10 min。 5. 弃掉甲醇，将培养皿倒干净，使其干燥。 6. 每 25...

培养物用甲醇固定，直接用未稀释的 Giemsa 液进行染色，然后1：10 稀释染液，清洗培养物，在潮湿状态下观察。 本程序假设用单层细胞进行染色，而固定的悬浮细胞也可以使用，但从第6 步开始。 1. 移除培养基。 2. 用 D-PBSA 冲洗单层细胞，去掉冲洗液。 3. 加 D-PBSA / 甲醇液 5 ml/25 cm 2 ，静置 2 ...

将培养物放在显微镜的载物台上，打开电源，选择合适的镜头，聚焦于标本。如果必要的话，将聚光器和相差环调节在中心。 1. 确保显微镜（配有相差10×、20× 或40× 的物镜及聚光器和合适的相差环）洁净（用 70 % 乙醇擦拭载物台。如果有必要，用擦镜纸清洁物镜）。 2. 打开电源，将灯光强度从最低开始调至合适的强度，而不是直接打到强光。 3. 检查光源与聚光器的衔接： (a)将一张染色...

这种方法可以得到除去了大多数杂质的高纯度质粒DNA。但它需要使用溴化乙锭，并且需要长时间的超速离心来形成密度梯度。 1.  粗裂解物制备方案最后一步得到的沉淀溶于4 ml TE缓冲液中，加入4.4 g CsCl，溶解后，再加入0.4 ml 10 mg/ml 溴化乙锭。 2.   将溶液转入一个5 ml 的quick-seal快速封口的超离心管中。 3.  酌情往管中加入CsCl/TE溶液...