体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2 或l:3 以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。   细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6 次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂...

研磨用胶原蛋白处理的整块骨骼肌，以分散为单肌纤维。在 Matrigel 上培养单肌纤维，然后收集迁出的细胞。 1. 处死动物后立即切除肌肉。注意夹持肌腱，以减少对肌纤维的损伤。 2. 将肌肉放入 0.2 % Ⅰ型胶原蛋白酶液（W / V，用 DMEM 配制），在 35°C 条件下用摇动水浴箱孵育 60~90min。较大肌肉需要较长消化时间，一般情况下取自 6~8 周大鼠的趾长伸肌需消化 60 min 。 3....

1. 染色：铁苏木精 2. 肉眼观察： 切片上有两块标本，长条形的为纵切面，椭圆形的为横切面， 先观察纵切面。 3. 骨骼肌组织纵切面 3.1 低倍镜观察： 骨骼肌纤维呈长圆柱形，相互平行排列聚集呈束。由于肌纤维长，标本中往往不能见到其两端。分辨一条肌纤维的两侧边界，转高倍镜。 3.2 高倍镜观...

1. 染色：HE 2. 肉眼观察： 标本呈圆形，中间不规则的腔隙是肠腔，周围的组织为肠壁 外层染成红色的是平滑肌。 3. 低倍镜观察： 平滑肌组织染色较其附近的结缔组织红。平滑肌组织较厚， 可分为两层且排列方向不同，内层的为纵切面，平滑肌纤维呈长梭形，外层为横切面，较薄，平滑肌纤维呈大小不一圆点形。 ...

目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中（－196 ℃），保存时间可长达一年甚至几年，用时解冻，大多数细胞仍能生长繁殖，为妥善起见，细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂，否则，细胞内外的水会结成冰晶，使细胞发生机械损伤。加入保护剂后，可使冰点降低，在缓慢冻结的条件下，细胞内的水分在冻结前渗出到细胞外，避免冰晶的损伤。目前常用的保护剂为甘油和二甲基亚砜（DMSO），它们对细胞无毒，分子量小溶解度大，易穿透细胞，使用浓度甘油为10％～20％，二甲基亚砜5...

在添加 20 %（fetal bovine serum，FBS）的 Ham’s F12 培养中，原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下，这些细胞增殖和分化，融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。 一、分离 1. 用手术刀切除活检组织块上的非肌性组织，然后用 D-PBSA 浸洗。 2. 称重前，与肌纤维平行将切除活检组织切成片，用冲洗。 3. 将组织片平行放...

1. 染色：镀银法 2. 肉眼观察： 骨磨片较切片厚，而且厚薄不均匀，观察时应选较薄处。 3. 低倍镜观察： 因标本由干骨制作，故切片中无软组织，主要分辨密质骨中的四种骨板： （1） 外环骨板：位于骨表面；骨板与骨表面平行排列，层次较多而整齐。 （2）内环骨板：位于骨髓腔面，沿骨髓腔面排列，骨板层次少且厚薄不一。 ...

加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中， 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部， 从而达到提取的目的。 1.  收取10~50 g 新鲜的植物组织。 2.  植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干，放人液氮中冻结，用研钵和研杵研成细粉。 3.  将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中，立即加入抽提缓冲液约每克植物5~10 ml，轻轻搅拌混匀。 ...

体外培养的细胞主要有两种状态。一种是能贴附在培养支持物上的细胞，如HeLa 细胞、NIH3T3 等，叫贴壁型细胞，体外培养的细胞大多属于这种细胞。另一种细胞并不贴附在容器的壁上，而是悬浮在培养液中生长，如HL60 细胞，叫做悬浮型细胞，这类细胞主要是血液原性或癌原性细胞。在细胞生物学的实验中，往往要进行活细胞的鉴定和细胞的计数、调整细胞的密度，是进行实验不可缺少的一种基本技能。 一、培养细胞形态观察 ...

1. 从小牛取胸主动脉。 2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。 3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。 4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。 5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。 6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面，以除去内皮细胞。 7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。 8....