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植物组织制备基因组DNA实验-氯化铯法

加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。 1.  收取10~50 g 新鲜的植物组织。 2.  植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干,放人液氮中冻结,用研钵和研杵研成细粉。 3.  将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中,立即加入抽提缓冲液约每克植物5~10 ml,轻轻搅拌混匀。 ...

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骨磨片形态学观察实验

1. 染色:镀银法 2. 肉眼观察: 骨磨片较切片厚,而且厚薄不均匀,观察时应选较薄处。 3. 低倍镜观察: 因标本由干骨制作,故切片中无软组织,主要分辨密质骨中的四种骨板: (1) 外环骨板:位于骨表面;骨板与骨表面平行排列,层次较多而整齐。 (2)内环骨板:位于骨髓腔面,沿骨髓腔面排列,骨板层次少且厚薄不一。 ...

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方案23.14 从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞

在添加 20 %(fetal bovine serum,FBS)的 Ham’s F12 培养中,原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下,这些细胞增殖和分化,融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。 一、分离 1. 用手术刀切除活检组织块上的非肌性组织,然后用 D-PBSA 浸洗。 2. 称重前,与肌纤维平行将切除活检组织切成片,用冲洗。 3. 将组织片平行放...

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细胞的冻存与复苏实验

目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中(-196 ℃),保存时间可长达一年甚至几年,用时解冻,大多数细胞仍能生长繁殖,为妥善起见,细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂,否则,细胞内外的水会结成冰晶,使细胞发生机械损伤。加入保护剂后,可使冰点降低,在缓慢冻结的条件下,细胞内的水分在冻结前渗出到细胞外,避免冰晶的损伤。目前常用的保护剂为甘油和二甲基亚砜(DMSO),它们对细胞无毒,分子量小溶解度大,易穿透细胞,使用浓度甘油为10%~20%,二甲基亚砜5...

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平滑肌形态学观察实验

1. 染色:HE 2. 肉眼观察: 标本呈圆形,中间不规则的腔隙是肠腔,周围的组织为肠壁 外层染成红色的是平滑肌。 3. 低倍镜观察: 平滑肌组织染色较其附近的结缔组织红。平滑肌组织较厚, 可分为两层且排列方向不同,内层的为纵切面,平滑肌纤维呈长梭形,外层为横切面,较薄,平滑肌纤维呈大小不一圆点形。 ...

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骨骼肌形态学观察实验

1. 染色:铁苏木精 2. 肉眼观察: 切片上有两块标本,长条形的为纵切面,椭圆形的为横切面, 先观察纵切面。 3. 骨骼肌组织纵切面 3.1 低倍镜观察: 骨骼肌纤维呈长圆柱形,相互平行排列聚集呈束。由于肌纤维长,标本中往往不能见到其两端。分辨一条肌纤维的两侧边界,转高倍镜。 3.2 高倍镜观...

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方案23.15 从骨骼肌分离和培养单肌纤维

研磨用胶原蛋白处理的整块骨骼肌,以分散为单肌纤维。在 Matrigel 上培养单肌纤维,然后收集迁出的细胞。 1. 处死动物后立即切除肌肉。注意夹持肌腱,以减少对肌纤维的损伤。 2. 将肌肉放入 0.2 % Ⅰ型胶原蛋白酶液(W / V,用 DMEM 配制),在 35°C 条件下用摇动水浴箱孵育 60~90min。较大肌肉需要较长消化时间,一般情况下取自 6~8 周大鼠的趾长伸肌需消化 60 min 。 3....

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细胞的传代培养实验

体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2 或l:3 以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养。   细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6 次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂...

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心肌形态学观察实验

1. 染色:铁苏木精 2. 肉眼观察: 标本为心壁的一部分。 3. 低倍镜观察: 由于心肌纤维排列方向不一致,有纵、横、斜等切面,故要全面观察标本,熟悉各种切面的部位。心肌纤维呈不规则短圆柱状,有分枝且互相吻合成网为纵切面,呈圆形或循圆形的小块为横切面。 4. 高倍镜观察: 选择形态典型的心肌纤维纵切面观察,注意与骨骼肌...

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放线菌素D诱导HL-60细胞凋亡的观察实验-凝胶电泳法

放线菌素D(actinomycin D)是抗肿瘤类抗生素,其主要作用是通过与DNA 结合,阻断依赖DNA 的mRNA 的合成,从而阻碍蛋白质合成,抑制瘤细胞分裂,引起细胞凋亡。细胞凋亡时,其核染色质的DNA 出现缺口甚至断裂,致使染色质凝聚、边缘化甚至呈现DNA 碎片。利用与DNA 结合的荧光染料染色后,在荧光显微镜下即可观察到上述变化。Hoechst33258 为与A-T 结合的特异性DNA 染料,对活细胞和固定细胞均能染色。 ...

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