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细胞形态的观察实验-丽藻细胞内胞质环流

丽藻细胞大,整个细胞的中央为大液泡占据。靠近液泡是一层溶胶样流动的内质,在内质与质膜之间,为静止的外质,其中含有叶绿体。内质中含有许多颗粒,可以清楚地看到胞质环流。在丽藻细胞中的微丝与胞质环流有密切关系。成束的微丝出现在外质与内质接口(溶胶和凝胶接口)并交织一起,与环流方向平行。用细胞松弛素B处理后,就可抑制胞质的环流运动。 一、方法 1.  剪下一小块丽藻叶片(1~2 cm),置于载片上,盖上盖片。 ...

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细胞器的观察实验 -电镜切片

一、高尔基复合体(Golgi Complex) 1.  人体胃粘膜细胞高尔基复合体电镜照片:细胞质中有散在的高尔基复合体,其结构要由三部分组成:扁平囊、大囊泡和小囊泡,它们共同构成紧密重叠的囊泡结构。 2.  扁平囊约3~8层,它们平行排列,略弯曲成弓形。 3.  凸出的一侧为形成面,可见许多小囊泡,凹入的一侧为成熟面,可见扁平囊末端呈球形膨大,在分泌细胞中膨大部分不断脱离扁平...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离牛主动脉内皮细胞(PAECs)

本方法是由 Bravery 等 [ 1995 ] 的方法改写的。 1. 将铝箔铺在软木板上。 2. 将主动脉(新鲜猪主动脉:如条件允许,需无菌取材。放入 HBSS/PSGA 中转运)放于 70 % 乙醇浸泡的棉纸上面,然后轻拍动脉以吸干表面的液体。 3. 在铝箔覆盖的软木板上,修剪主动脉周围组织,只保留分支。不要将分支剪得过短。 4. 用线结扎分支,夹住主动脉细端。 ...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离小鼠心脏内皮细胞(MCECs)

本方法是由 Marelli-Berg 等 [ 2000 ] 的方法改写的。 1. 将心脏放入盛有约 5 ml HBSS/PS(HBSS,添加 150 U/ml 青霉素和 150 μg/ml 链霉素) 的 Petri 培养皿。 2. 除去主动脉和肺动脉等与心脏相连的血管。 3. 将心脏(小鼠心脏:放入含有 300 U/ml 青霉素和链霉素混合液、50 μg/ml 庆大霉素的 HBSS/PSG)切成两半,取出较大...

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方案23.18 血管内皮细胞的分离和培养-分离人心脏内皮细胞(HCEC)

根据 McDouall 等 [ 1996 ] 的方法可以分离人的 CEC。 1. 按分离小鼠心脏内皮细胞的步骤操作。 2. 在步骤 7 用 Ⅱ 型胶原蛋白酶(1 mg/ml)消化组织。 3. 按照方案23.28C 的步骤 20,用包被人 MHC-Ⅱ 类抗原或 CD31 抗体的磁珠分选内皮细胞。然后,从方案23. 28C 的步骤23 继续操作。 4. 用 HCEC 生长培养液(含有 4...

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细胞膜流动性测定实验

常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后,介质粘度增加,顺反异构受到抑制,成为唯一能发光的全反构型。 1.  取对数生长期的肿瘤细胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。 2.  取10 7 个细胞,离心,加入2×10 6 mol/l DPH溶液2 ml。 ...

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细胞生理活动的观察实验-细胞的吞噬活动

白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能,如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中,以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强,故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走,然后伸出伪足包围异物,并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞,继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物。 1.  实验前二天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉...

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荧光原位杂交实验-基本方案

1a.  石蜡切片或细胞的杂交:按“”的基本方案步骤1~7,对载玻片进行脱蜡、水化、 封闭和脱水处理。将标本晾干(或在干燥器中干燥),随后贮于加有干燥剂的载玻片盒中,置-70℃过夜。 1b.  冰冻切片的杂交:按“”的备择方案步骤1~7,进行切片的预处理和乙酰化处理, 随后进行切片的脱水。 2.  对每一杂交实验,可用乙醇沉淀10~15 ng 探针,重溶于10 ml 去离子的甲酰胺中,加5 μg(0.5 μl)超声处理的...

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细胞组分的化学反应实验-Brachet反应

细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。 一、方法 1.  接种Hela细胞于盖片上并培养24~48小时,使长成单层。 2.  取出盖片,用PBS...

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细胞组分的化学反应实验-细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示

由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带正电荷多,则为碱性蛋白质。据此,可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后,用不同pH值的固绿染液分别染色,细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。 一、方法 1.  以破坏脊髓法处死蟾蜍,将其腹面向上放人蜡盘中,剪开胸腔,打开心包。小心将心脏剪一小口,取心脏血一滴滴在干净...

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