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MTT(四唑盐)比色法

MTT法是Mosmann 1983年报道的,以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值。 一、经验总结 1.  首先细胞的接种密度一定不能过大,一般每孔1000个左右就够了,我认...

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石蜡切片免疫组化实验-链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(SABC)法

SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从链霉菌(streptomyces)培养物中提取,因此称为链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidase complex metho...

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石蜡切片免疫组化实验-卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法

1.  4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后; 2.  加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢)30 min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01 M  PBS清洗5 min×3; 3.  加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X10...

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石蜡切片免疫组化实验-即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法

根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入底物显色。 一、特点 1.  在切片加上一抗后,第二抗体标记多聚螯合物酶(HRP)的复合物与一抗结合,在多聚螯合物上有大量的HRP分子,使抗原信号有显著的放大,其敏感性较SABC、SP法高。 2.  由于多聚物在体内不存在,又不使用生物素,从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色,...

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染色体提前凝集标本制备实验

七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyCondensedChromosome,PCC)。这项技术已应用于细胞周期分析、正常细胞和肿瘤细胞染色体的微细结构的研究、多种因素作用细胞使染色体损伤及修复效应的研究,预测某种血液病的病程、愈后及复发的临床实...

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正常细胞常规核型的标本制备实验-肿瘤细胞的染色体标本制备

利用肿瘤细胞无限繁殖的特点,掌握其体外生长动态,取处于对数生长期的细胞便可获得丰富的分裂相。肿瘤细胞染色体异常包括两个方面:1.  结构异常  即在肿瘤细胞常出现的染色体畸变,包括双着丝点染色体、环状染色体、断裂的染色体、染色体裂隙及微小体等。2.  数目异常  由于肿瘤细胞分裂失去应有的调控,可出现亚二倍体、超二倍体和多一倍体数目异常现象。肿瘤细胞染色体制备技术在细胞生物学、医学遗传学的基础研究和临床诊断、愈后观察等方面均有广泛用途。 1.  ...

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正常细胞常规核型的标本制备实验-人淋巴细胞染色体标本制备

在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素,破坏细胞纺锤体的形成,使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞,低渗处理,使细胞胀大,染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质,使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片,然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。 1.  微量全血细胞培养至68小时左右,用1 ml 注射器号针头向每个5 ml 培养瓶内加2滴秋水仙素溶液。 2.  摇匀后继续培养3小时,此项操作不需要严格无...

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正常细胞常规核型的标本制备实验-微量全血培养

人体微量全血培养是一种简单的淋巴细胞培养方法。此法采血量少、操作简便,在PHA作用下进行短期培养即可获丰富的、有丝分裂活跃的淋巴母细胞,适于制备核型标本。各种因素的效应(如病毒、电离辐射、化学药剂等)也可在淋巴细胞的培养条件下进行观察,从而进行多种在体内无法进行的研究。 1.  打开超净台紫外灯20~30分钟。 2.  洗手、换洁净白大衣后进入操作室。启动超净台,点燃煤气灯。 3.  用75%酒精...

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筛分型琼脂糖凝胶电泳实验

1.  在TAE电泳缓冲液中熔化3%~5%低熔点筛分型琼脂糖。将胶倒入普通琼脂糖凝胶装置中。 2.  与普通琼脂糖凝胶一样加样和电泳。(对2%的凝胶溴酚蓝迁移到大约50 bp) 3.  分离低熔点琼脂糖中片段。(对于<1 000 bp 的片段回收的产量与用普通的低熔点琼脂糖相似,对于<500 bp 的片段分离度可达到最高) ...

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