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Southern 印迹实验-碱性缓冲液法

用带正电荷的尼龙膜时,如果用碱性转移缓冲液,则转移的DNA可共价结合于膜上。 1.  印迹法中步骤1和歩骤2中所述准备凝胶及用0.25 mol/l HCl处理。 2.  用蒸馏水漂洗凝胶,并用10倍体积的0.4 mol/l NaOH变性,缓慢摇动20 min。 3.  用0.4 mol/l NaOH替代20×SSC作为转移液进行转印。转印时间≥2 h。 ...

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人肿瘤抗原的识别与鉴定实验

一、 裂解细胞 1.  方向刮取细胞。将细胞悬液转移到离心管,离心取沉淀,-80℃ 保存。(收集细胞要迅速,低温下进行,以减弱蛋白酶的作用) 2.  裂解细胞。采用RIPA 裂解体系,使用前40℃ 预冷,按10 7 个细胞加入1.0 ml 裂解液,吹打混匀,加入适量的蛋白酶抑制剂 (如cocktail), 冰上放置3~5 分钟。 ...

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组织病理实验-石蜡切片法

石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。 一、材料准备: 1.  中性甲醛固定液: 甲醛(37%-40%,市售,本所购买即为此浓度)100 mL ...

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组织病理实验-冰冻切片

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断。 一、 取材 应尽可能快地采取新鲜的材料,防止组织发生死后变化。 二、速冻 ...

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人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养

1. 将15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的PBS 溶液中储存。(注:4℃下最多贮存24 小时,室温下不超过6 小时,否则废弃) 2. 用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中,用无菌的PBS 溶液冲洗3-5 次,将污血冲洗干净为止。 3. 用手术钳夹紧脐带下端,加入15ml 的胶原酶(1mg/ml)室温下消化15-20分钟,并不时上下摇动脐带 4. 消化完后,将下端手术钳松开,消化液流入一个50...

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非标记抗体免疫电镜实验-经典法

标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2,一个Fab片段与标本中的抗原结合,一个Fab是抗体蛋白的结合片段...

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非标记抗体免疫电镜实验-快速法(琼脂扩散法)

标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2,一个Fab片段与标本中的抗原结合,一个Fab是抗体蛋白的结合片段...

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放射免疫对流电泳实验

将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时,沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影,就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线,作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影,再经过显影把“像”显示出来。这样,能检出肉眼看不见的沉淀线,从而提高反应的敏感性,这种方法可应用于凝胶中的所有反应。 一、材料 1.  放射性同位素标记的抗原或抗体 2.  X—射线胶片或全色胶片 ...

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多克隆抗体提取实验-批量提取法

1.  称取DEAE-纤维素(DE32或DE52)50 g,置于1 000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05 mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。 2.  将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1 ml血清加湿重5 gDEAE纤维素,经过充分搅拌,置4℃吸附1 h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。 ...

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