采用标记有雌二醇单克隆抗体的胶体金颗粒与相对应的固定在硝酸纤维膜上的雌二醇结合物相结合，固定有雌二醇结合物的检测线处就显现明显的颜色。 一、试剂与仪器 氯金酸；牛血清白蛋白、卵清白蛋白、兔抗鼠多抗；雌二醇标准品、雌二醇单抗、17β-Estradiol-6-one6-(o-carboxymethvyoxime)。硝酸纤维膜、玻璃纤维膜；Beckman Du530分光光度计；低温高速离心机；点膜机。 ...

将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中，使两者互相扩散，当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时，沉淀线在两孔的中间。如抗体过量，沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量，沉淀线靠近抗体孔。此技术可以测定抗血清的效价。   此外，根据沉淀融合的情况，还可以鉴定两种抗原是否完全相同。两种抗原部分相同的情况下，则形成部分交叉和部分融合的沉淀线（如下图）。 1. 将盛有3 ml生理盐水琼脂的小试管置水浴中熔化。 ...

淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物（简称AET）处理的绵羊红细胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴细胞均能吸附AET—SRBC，形成牢固稳定而巨大的E—花环，较正常未处理的SRBC形成的E—花环百分比为高，而且形成快速，不易脱落，重复性好。再经淋巴细胞分层液分离时，AET—E花环易沉于管底，而未形成E—花环的T淋巴细胞，用低渗液解花环周围的AET—SRBC，便可获得纯T淋巴细胞，而B淋巴细胞可直接取自分层液的界面。 1. AET—RRBC...

1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。 2.  如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10~-20℃）固定15 min。 3.  吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以...

1.  细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。 2.  离心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重悬细胞，置冰上固定30 min。 3.  离心、吸去固定液，用15 ml 4℃ PBS重悬细胞，放5 min 后，用PBS再次洗涤细胞。 4.  稀释的第...

因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小，DNA不能在其横截面上有效地扩散，毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。 1.  在非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳DNA样品。 2.  电泳将近结束时，将一张大小足以覆盖凝胶中相应部分的尼龙膜漂浮于蒸馏水表面，然后浸入水中泡5 min。 3.  从电泳装置中取去一块玻璃板，染色后对凝胶进行照...

1.  当进行双标记实验时，最重要的准则是：第一抗体应为不同类型，从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体，这一要求就有可能达不到，当使用单抗时，不同型的抗体如IgG和IgM，可被第二抗体确切区分。但不同亚类（IgG 1和IgG 2）的抗体通常不能被二抗确切区分。 2.  实验操作过程和“”相同，例外的是所加第一抗体和第二抗体由两种第一抗体及两种第二抗体的混合成分所替换。 ...

免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。 一、材料与试剂准备 1.  马脾铁蛋白 2.  硫酸铵 3.  硫酸镉 4.  双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante  XC)：以0.30 mol/L pH9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的...

间歇循环刺激法 是制备抗原特异性T细胞克隆的传统方法，即经抗原间隔刺激多个循环。 一、材料和试剂 1.  抗原致敏供者的单个核细胞(MNC)和经过3 300 rad照射的自身MNC 2.  抗原 3.  含10%人AB型血清的完全RPMI 1640培养液 4.  细胞分离及T细胞培养增殖所需的其他试剂和器材 二...

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 一、材料与试剂配制 ...