1.  在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜，需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。 2.  用TTBS溶液（用于硝酸纤维素膜或PVDF膜）或TBS溶液（用于尼龙膜）稀释第一抗体。 3.  从封闭液中取出膜，放入第一抗体溶液中。于37℃缓慢摇动30 min。 4.  在TTBS或TBS中洗膜3次，毎次超过15 mi...

1.  将膜放入可热密封的塑料袋，加5 ml 封闭液，密封塑料袋，在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2.  用封闭液稀释第一抗体（取决于抗体和检测系统，以1：10~1：100 000稀释）。 3.  打开袋子，倾去封阻液，以稀释的第一抗体工倾代替之。在室温下持续摇动30~60 min。 4.  带着手套从塑料袋子中取出膜，放在塑料盒子中摇动着用200 ml TT...

选用本方法可产生用于放射自显影的 32 P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关，标记DNA可稳定数月之久。 1.  在20 μl 反应体积中，用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。 2.  加入20 μl Ci所需的［α- 32 P］标记下dNTP（400~800 Ci/mm...

用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应，补体就结合在抗原-抗体复合物上，再用抗补体的荧光抗体与补体结合，从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物，在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处，此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。 免疫荧光法目前多用于临床检验： 1. 检测组织内免疫球蛋白或免疫复合物，如肾炎之肾穿刺标本、红斑狼疮之皮肤组织等； 2. 检查血液内自身抗体，此时常用小鼠的 组...

选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb，1种McAb作为包被抗体，另1种McAb标记辣根过氧化物酶（HRP）作为结合物，催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本的含量。 1.  向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100 μl/孔， 4 ℃  24～48 h 2.  洗3次，加入10倍连续稀释的待测标本（ ...

采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。 1.  包被 pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96 孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。 2.  封闭 ...

将抗Tac特异性单克隆抗体Ab1吸附于固相载体，识别细胞培养上清或血清等标本中Tac并与之结合。应用辣根过氧化物酶标记的识别另一种Tac表位的特异性单克隆抗体Ab2识别固定于固相载体的Tac并与之结合。通过酶催化底物显色反映待检标本中游离Tac的水平。 1.  刺激外周血单个核细胞（PBMC） 取外周血10 ml，肝素抗凝，常规分离单个核 细胞，加至24 孔细胞培养板，2×10 ...

TNF-α受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞，根据TNF-α与相应靶细胞结 合后引起不同的生物学效应，建立了多种检测TNF-α生物学活性方法。某些肿瘤细 胞膜表面的TNF-α受体与TNF-α结合后，可导致这些肿瘤细胞的死亡，可通过检测 对肿瘤细胞的杀伤能力，来反映TNF-α的生物学活性。若这种肿瘤细胞先用 3 HTdR 标记，则被杀伤后 ...

干扰素能刺激某些指示细胞（如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以 及人胚肌皮或肺单层细胞）产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒（VSV） 的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。 1.  96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN， 每个稀释度设3 孔，每孔50 μl，病毒对照不加IFN 2. ...

IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长，故又称为杂交瘤生长因子（ HGF）。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系，由Van Snick 1986年建 立，只有在IL-6存在的培养基中才能生长，可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6 水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60BSF2、B9等。 1.  IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI164...