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标记抗体的应用技术-ELISA

ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法...

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标记抗体的应用技术-BA-ELISA

BA-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,分子量为68 kDa,由4个亚单位组成,对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。 ...

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标记抗体的应用技术-免疫斑点试验

硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效 地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜 作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合),然后再加入 带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜 上。加入标记物相应的底物后,标记物即可与底物作用形成不溶性产物,呈现斑点状 着色...

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标记抗体的应用技术-化学发光免疫分析

尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H 2 O 2 反应体系产生化学发光, 但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提 高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H 2 O 2 ...

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标记抗体的应用技术-125I标记单克隆抗体竞争结合试验

125 I标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合,有数百倍以上未 标记的特异性抗体同时存在的条件下,则标记抗体的结合受到竞争性抑制。根据不 同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值,可以计算出每个 细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力。 1.  硅化规格相同的5 ml玻璃管,双蒸水冲净后烤干, 每次实验分6~12...

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溶血空斑形成试验

溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合,在补体参与下,使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解,形成肉眼可见的溶血空斑。根据所操作的方法不同可分为直接溶血空斑试验,间接溶血空斑试验,琼脂固相法,小室液相法,单细胞层法等等。 1.  底层琼脂平皿的制备 将1.4 %琼脂加热融化后倾注于平皿内,每个平皿6 ml, 凝固后置湿盒37 ℃备用。 ...

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细胞因子生物学活性检测实验-白细胞介素-1生物学活性检测

白细胞介素1是一种重要的细胞因子,主要由单核-巨噬细胞产生,IL-1不仅对多 种免疫活性细胞有重要的调节功能,而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变 化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。 一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1 生物学活性 小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体,在有...

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细胞因子生物学活性检测实验-白细胞介素-2生物学活性检测

IL-2主要由活化T细胞产生,又为T细胞增殖所必需,故称T细胞生长因子( TCell Growth factor, TCGF )。IL-2产生的水平反映T细胞的功能,仅是免疫调节重要的研究对象,而且与临床多种疾病密切相关,CTLL是C57BL/6来源的。鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系,由Gills 1977年建立,只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外,丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。 ...

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DNA作图实验-限制酶部分消化

1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2.  用 32 P末端标记消化产物,5’末端可先用小牛肠碱性磷酸酶处理。 3.  用T4多核苷酸激酶进行标记。 4.  3’末端可先用大肠扞菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA聚合酶来标记。 5.  用第二种内切酶消化DNA片段,通...

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细胞因子生物学活性检测实验-白细胞介素-6生物学活性检测

IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长,故又称为杂交瘤生长因子( HGF)。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系,由Van Snick 1986年建 立,只有在IL-6存在的培养基中才能生长,可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6 水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60BSF2、B9等。 1.  IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI164...

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