标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2，一个Fab片段与标本中的抗原结合，一个Fab是抗体蛋白的结合片段...
查看详情标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2，一个Fab片段与标本中的抗原结合，一个Fab是抗体蛋白的结合片段...
查看详情1. 将15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的PBS 溶液中储存。（注：4℃下最多贮存24 小时，室温下不超过6 小时，否则废弃） 2. 用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS 溶液冲洗3-5 次，将污血冲洗干净为止。 3. 用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml 的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带 4. 消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50...
查看详情冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间。同时，由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断。 一、 取材 应尽可能快地采取新鲜的材料，防止组织发生死后变化。 二、速冻 ...
查看详情石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。 一、材料准备： 1. 中性甲醛固定液： 甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100 mL ...
查看详情一、 裂解细胞 1. 方向刮取细胞。将细胞悬液转移到离心管，离心取沉淀，-80℃ 保存。（收集细胞要迅速，低温下进行，以减弱蛋白酶的作用） 2. 裂解细胞。采用RIPA 裂解体系，使用前40℃ 预冷，按10 7 个细胞加入1.0 ml 裂解液，吹打混匀，加入适量的蛋白酶抑制剂 （如cocktail）， 冰上放置3~5 分钟。 ...
查看详情用带正电荷的尼龙膜时，如果用碱性转移缓冲液，则转移的DNA可共价结合于膜上。 1. 印迹法中步骤1和歩骤2中所述准备凝胶及用0.25 mol/l HCl处理。 2. 用蒸馏水漂洗凝胶，并用10倍体积的0.4 mol/l NaOH变性，缓慢摇动20 min。 3. 用0.4 mol/l NaOH替代20×SSC作为转移液进行转印。转印时间≥2 h。 ...
查看详情斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。 一、试剂及材料 1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6 cm），分为底、盖两层，盖的中央有一个直径0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料，盖孔下，紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭...
查看详情细胞爬片免疫荧光实验步骤 第一天： 1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min； 2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min； 3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）； 4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水...
查看详情一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3 分钟。弃上清, 再吸取8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀, 再1500 转/分, 离心3 分钟, 弃上清, 细胞沉淀用1.0ml 培养基混匀, 备用。另取一个75cm2 方瓶, 加入14.0ml 培养基质, 将上述制备的含肿瘤细胞悬液(1.0ml)加入此方瓶中, 于37℃，5%CO2 孵育...
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