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细胞组分的化学反应实验-细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示

由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;带正电荷多,则为碱性蛋白质。据此,可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后,用不同pH值的固绿染液分别染色,细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。 一、方法 1.  以破坏脊髓法处死蟾蜍,将其腹面向上放人蜡盘中,剪开胸腔,打开心包。小心将心脏剪一小口,取心脏血一滴滴在干净...

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细胞组分的化学反应实验-细胞内过氧化物酶的显示

过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物,用联苯胺处理标本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。 一、方法 1.  取小鼠一只,以颈椎脱位法将其处死,迅速剖开其后肢暴露出股骨,将股骨一端斜向剪断,用PBS缓冲液湿润过的注射器针头吸出骨髓一滴滴到载玻片上。 2.  推片,室温晾干。 3.  将涂...

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细胞组分的化学反应实验-过碘酸雪夫反应(PAS)

组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示,其化学基础是利用过碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。 一、方法 1.  取1~2 mm 厚的肝组织块,用Carnoy氏液4℃固定4~6小时。 2.  乙醇脱水、二甲苯透明。石蜡包埋,切片。 3.  用70%乙醇展片。 4.  脱蜡:二...

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细胞核的分级分离实验

1.  用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复洗涤,尽量除去血污,用滤纸吸去表面的液体。 2.  将湿重约1 g 的肝组织放在小平皿中,用量筒量取8 ml 预冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液,先加少量该溶液于平皿中,尽量剪碎肝组织后,再全部加入。 3.  剪碎的肝组织倒入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿...

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线粒体的分级分离实验

1.  将装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17 000 rpm 离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。 2.  加入0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙液1 ml,用吸管吹打成悬液,以17 000 rpm 离心20分钟。 3.  将上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入0.1 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液混匀成悬液(可用牙签)。 ...

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台盼蓝(trypan blue)排斥实验

台盼蓝染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。 1.  将待染色细胞稀释至所需浓度。(方法及浓度范围与细胞计数相同) 2.  每0.1 ml 细胞悬夜约加新鲜配置的染液一小滴,室温下染3~5 min 。 3.  染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放在高倍镜下观察。 ...

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细胞分裂的形态观察实验-无丝分裂

无丝分裂不仅是原核生物增殖的方式,而且雷马克(Remak)于1841年最早在鸡胚血细胞中也发现此现象,因为此过程没有出现纺锤丝和染色体的变化,故称无丝分裂(Ami- tosis)。其后无丝分裂又在各种动植物中陆续发现,尤其在分裂旺盛的细胞中更多见,但遗传物质平均分配否及其分裂的机制尚不十分清楚。 1.  蛙红细胞体积较大、数多,而且有核,是观察无丝分裂的较好材料。 2.  在高倍镜下,可见到处于不同阶段分裂过程中的蛙红细胞...

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筛分型琼脂糖凝胶电泳实验

1.  在TAE电泳缓冲液中熔化3%~5%低熔点筛分型琼脂糖。将胶倒入普通琼脂糖凝胶装置中。 2.  与普通琼脂糖凝胶一样加样和电泳。(对2%的凝胶溴酚蓝迁移到大约50 bp) 3.  分离低熔点琼脂糖中片段。(对于<1 000 bp 的片段回收的产量与用普通的低熔点琼脂糖相似,对于<500 bp 的片段分离度可达到最高) ...

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正常细胞常规核型的标本制备实验-微量全血培养

人体微量全血培养是一种简单的淋巴细胞培养方法。此法采血量少、操作简便,在PHA作用下进行短期培养即可获丰富的、有丝分裂活跃的淋巴母细胞,适于制备核型标本。各种因素的效应(如病毒、电离辐射、化学药剂等)也可在淋巴细胞的培养条件下进行观察,从而进行多种在体内无法进行的研究。 1.  打开超净台紫外灯20~30分钟。 2.  洗手、换洁净白大衣后进入操作室。启动超净台,点燃煤气灯。 3.  用75%酒精...

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正常细胞常规核型的标本制备实验-人淋巴细胞染色体标本制备

在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素,破坏细胞纺锤体的形成,使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞,低渗处理,使细胞胀大,染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质,使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片,然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。 1.  微量全血细胞培养至68小时左右,用1 ml 注射器号针头向每个5 ml 培养瓶内加2滴秋水仙素溶液。 2.  摇匀后继续培养3小时,此项操作不需要严格无...

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